高效液相色谱法测定多类食品中胭脂虫红的含量(二）

2、高效样品前处理条件的液相胭脂选择

目前食品中使用的胭脂虫红产品多为胭脂红酸与氢氧化铝反应沉淀所得的红色固体-胭脂红铝，胭脂红铝略溶于醇、色谱热水，法测不溶于冷水，定多的含因此必须将胭脂红铝转化为水溶性的类食量胭脂红酸之后方可进行检测。由文献[15]可知，品中在酸性条件下，虫红氧化铝或者氢氧化铝可以形成可溶性的高效Al（OH2）63+，色素会与氧化铝或氢氧化铝分离而溶于水中。液相胭脂因此本实验使用盐酸溶液在80℃水浴中将胭脂红铝转化为水溶性的色谱胭脂红酸进行检测。

实验考察了2mol/L盐酸溶液5.00mL和甲醇20.0mL，法测2mol/L盐酸溶液10.0mL和甲醇15.0mL，定多的含2mol/L盐酸溶液15.0mL和甲醇10.0mL，类食量2mol/L盐酸溶液25.0mL四种提取液对测定的品中影响。本实验以阳性样双莓味红丝绒蛋糕（1#）为样品，比较了用四种提取液提取之后所得胭脂红酸的峰面积，结果如图四。结果表明，用2mol/L盐酸溶液10.0mL和甲醇15.0mL为提取液时，能有效的去除杂质的干扰，提取效果最好。实验还发现，在酸性条件下，胭脂红酸容易被吸附在聚酰胺填料上，在碱性条件下被解吸释放出来。故本实验采用5%氨水和甲醇（1∶1，v∶v）组成的混合液为洗脱液，对胭脂红酸进行解吸。
 

3、标准曲线与检出限

本实验以峰面积为纵坐标（y），以其浓度为横坐标（x，mg/L），绘制标准曲线，回归方程为y=73.23551x-19.78479，相关系数r=0.99998。结果表明胭脂红酸在2.5～100mg/L范围内线性关系良好。以取样量2.00g计，本法对样品的检出限为1.25mg/kg（S/N＞3），远低于GB2760-2014规定的各类食品中胭脂虫红的限量（以胭脂红酸计）。

4、精密度

将浓度为20mg/L的胭脂红酸标准工作液连续进样6次，测定仪器精密度，胭脂虫红迁移时间的相对标准偏差（RSD）为0.1%，峰面积的RSD为0.8%。连续6次测定阳性样品双莓味红丝绒蛋糕（1#），比较每次测定数据之间的差异，并计算6次测定值之间的相对标准偏差，测定结果重现性较好，相对标准偏差为0.9%。

5、加标回收率

以空白样品棒棒糖（3#）为本底，加标质量浓度分别为0.0155、0.124、0.249g/kg，按①样品的制备：将样品用粉碎机充分粉碎，后装入洁净的可密封盛样容器中，密封并标明标记，于0℃～4℃冷藏保存。②样品的提取与净化：称取粉碎均匀的样品2g置于50mL离心管中，加入2mol/L盐酸溶液10mL，旋紧盖子，置于80℃水浴中30min，取出冷却，之后再加入甲醇15mL，振摇混匀，待净化。胭脂红酸的加标回收率见表2。结果表明，方法的平均回收率在96%～105%，满足日常检测需要。

6、实际样品测定

对双莓味红丝绒蛋糕、香肠（原味）、棒棒糖、草莓味夹心饼干、巧克力豆（1～5#）五个批次的样品中胭脂虫红的含量进行测定，按①样品的制备：将样品用粉碎机充分粉碎，后装入洁净的可密封盛样容器中，密封并标明标记，于0℃～4℃冷藏保存。②样品的提取与净化：称取粉碎均匀的样品2g置于50mL离心管中，加入2mol/L盐酸溶液10mL，旋紧盖子，置于80℃水浴中30min，取出冷却，之后再加入甲醇15mL，振摇混匀，待净化。进行处理检测并计算其含量（以胭脂红酸计），结果见表3。

三、结论

本研究建立了食品中胭脂虫红含量的检测方法—高效液相色谱法，所检测试样对应食品类型为：焙烤食品、熟肉制品、糖果、代可可脂巧克力及使用可可脂代用品的巧克力制品，基本覆盖GB2760-2104《食品国家安全食品添加剂使用标准》所列允许添加胭脂虫红的常见食品种类。该方法线性范围较宽，灵敏度高，适用范围广，在实际样品检测的操作中具有可行性和准确性，能够满足食品安全检测的需要，可为相关国家标准的制定提供参考。

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