UPLC/MS/MS法测定饮料中甜蜜素、糖精钠和安赛蜜（一）

环己基氨基磺酸钠（又名甜蜜素）、法测乙酰磺胺酸钾（又名安赛蜜）和邻苯甲酰磺酰亚胺钠（又名糖精钠）是定饮常用的人工合成甜味剂，用于增加甜度，料中改善食品口感。甜蜜受利益驱使，素糖赛蜜市场上存在滥用和超范围使用的精钠情况。为了避免添加剂过量摄入对人体的和安潜在伤害，国家对不同类型食品中添加剂使用做了严格的法测规定。

《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》GB2760-2014与GB2760-2011相比，定饮面包、料中糕点、甜蜜饼干、素糖赛蜜复合调味料、精钠饮料类和配制酒中禁止使用邻苯甲酰磺酰亚胺钠，和安环己基氨基磺酸钠扩大用量和使用范围，法测乙酰磺胺酸钾用量和使用范围未发生变化，为了配合新版标准的执行，建立快速、准确、检出限低的检测方法是非常必要的。目前常用的检测方法有分光光度法、高效液相色谱法、超高效液相质谱法（UPLC/MS/MS）和离子阱飞行时间串联质谱法（LCMS-IT-TOF）等。本文通过优化样品前处理方法，应用超高效液相质谱法的高通量特点，建立UPLC/MS/MS法测定饮料中甜蜜素、糖精钠和安赛蜜的检测方法。

一、试验部分

1、仪器与试剂

超高效液相色谱-串联质谱仪（WatersXevoTQD）：电喷雾（ESI）接口、MSD检测器、Masslynx4.1软件；冷冻离心机（德国Sigma公司）；超声提取仪（ZEALWAYS22H）；电子天平（METTLERTOLEDOXS105DU）；电子天平（METTLERTOLEDOAR2130）；电子天平（上海友声衡器有限公司BS-600L）；旋涡混合器（VORETEX-5kylin-Bell）；微孔滤膜：0.22μm；甲醇（德国CNW质谱纯）；氨水（国药集团，分析纯）；PSA（德国CNW，分析纯）；沉淀剂：亚铁氰化钾溶液（43.4g/L）；乙酸锌溶液（43.9g/L）；标准品：环己基氨基磺酸钠（德国Dr.EhrenstorferGmbH）；乙酰磺胺酸钾（德国Dr.EhrenstorferGmbH）；糖精钠标准溶液（中国计量科学院）。

2、仪器参考条件

（1）超高压液相色谱条件

WatersAcquityUPLCTMBEHC18柱（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量5μL；柱温30℃。梯度洗脱程序见表1。

（2）质谱条件

负离子扫描（ESI-）；多反应离子监测（multiplereactionionmonitoring，MRM）；毛细管电压2.8kV；脱溶剂气温度为400℃；锥孔尾吹气为高纯氮气，流速为50L/h；脱溶剂气为高纯氮气，流速为800L/h。定性、定量离子对及锥孔电压、碰撞电压见表2。

3、试验方法

（1）试样制备

①可乐型饮料

a）脱气：取适量样品于烧杯中，用超声提取仪在40℃下超声5min；

b）净化：准确取2～5g（精确至0.0001g）样品，加水定容至10mL，摇匀，涡旋混匀，5000r/min离心5min，取上液经0.22μm微孔滤膜过滤，用于检测糖精钠与安赛蜜；准确取2～5g（精确至0.0001g）样品，加水定容至10mL，摇匀，涡旋混匀，加入0.5gPSA，5000r/min离心5min，取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，用于检测甜蜜素。

②不含乳的饮料

准确取2～5g（精确至0.0001g）样品，准确取2～5g（精确至0.0001g）样品，加水定容至10mL，摇匀，涡旋混匀，5000r/min离心5min，取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，用于检测糖精钠与安赛蜜；准确取2～5g（精确至0.0001g）样品，加水定容至10mL，摇匀，涡旋混匀，加入0.5gPSA，5000r/min离心5min，取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，用于检测甜蜜素。

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