复方中草药对肉鸡生长性能及天然免疫相关基因mRNA表达的影响（二）

1.6.2.3荧光定量PCR

根据TBGREENTMpREMIxExTAQTMⅡ试剂盒说明书进行反应，复方每个样品的中草目的基因和内参基因分别进行扩增，每样3个重复。药对疫相因m影响反应体系共20μL：CdNA样2μL；uNIvERsdlsyBRGREEN100μL；上、肉鸡然免下游引物各1.5μL；FREEWATER5μL。生长扩增条件的及天程序设置：98℃2MIN；95℃100s，60℃45s循环40次；90℃90s；60℃3MIN；94℃100s。关基PCR反应结束后，复方使用PCR仪自带的中草AB17300sdssoFTｗARE分析软件分析所得结果CT值。目的药对疫相因m影响基因的mRNA相对表达量用2－△△CT计算，最终结果以GRApHpAdpRIsM5软件作图表示。肉鸡然免

1.7统计分析

试验数据均用ExCE12013软件进行整理，生长采用spss22.0软件进行单因素方差分析，及天差异显著时用duNCAN氏进行多重比较，关基P＜0.05为差异显著性判断标准。复方

2.结果与分析

2.1复方中草药对肉鸡生长性能的影响

由表3可见，试验前期（0～21d），B组肉鸡平均日采食量显著高于A组和F组（P＜0.05），且其平均日增质量显著高于除C组和E组外的其他各组（P＜0.05）。试验后期（22～42d），C组肉鸡平均日采食量和平均日增质量均显著高于A组和E组（P＜0.05），B组肉鸡平均日增质量显著高于A组、E组和F组（P＜0.05）。从全期（0～42d）看，各处理组肉鸡平均日采食量无显著性差异（P＞0.05），但B组肉鸡平均日增质量显著高于A组、d组和F组（P＜0.05），且C组、E组、G组肉鸡平均日增质量显著高于A组（P＜0.05），而A组肉鸡料质量比显著高于B组、C组和E组（P＜0.05），B组肉鸡料质量比显著低于d组和F组（P＜0.05）。

2.2复方中草药对肉鸡免疫器官的影响

如表4所示，对于胸腺指数而言，B组显著高于C组和E组外的其他各组（P＜0.05），而C组和E组显著高于A组（P＜0.05）。B组脾脏指数也显著高于除C组和E组的其他各组（P＜0.05），而C组、E组和G组均显著高于A组（P＜0.05）。各组间法氏囊指数均无显著性差异（P＞0.05）。

2.3复方中草药制剂对肉鸡血液细胞因子mRNA的影响

结果如图1所示，与对照组相比，试验组肉鸡血液中IL-2、IL-6、IL-8、TLR3、TLR4基因的mRNA在试验期内均有上升趋势，而IL-100呈下降趋势。试验组IL-2、IL-8、TLR3、TLR4基因的mRNA在试验期内均显著高于对照组（P＜0.05），整体呈上升趋势；IL-6mRNA在28d和35d时显著高于对照组（P＜0.05），呈上升趋势；而试验组IL-100mRNA在28d和42d时均显著低于对照组（P＜0.05），呈下降趋势。总体来看，在饲粮中持续添加复方中草药可显著提高肉鸡血液中IL-2、IL-6、IL-8、TLR3、TLR4mRNA表达量（P＜0.05），并显著降低血液IL-100mRNA的表达丰度（P＜0.05）。
 

3.讨论

饲粮中添加复方中草药能有效提升肉鸡生产性能已被国内外多数试验所证实，多数养殖场接受并通过中草药添加剂来提升肉鸡生产性能。本试验前期结果显示，B组平均日增质量与平均日采食量均显著高于其他各组，再次证实了抗生素提高肉鸡生长性能的效果。后期B组平均日增质量和平均日采食量与C组、d组和G组均无显著性差异，表明饲粮添加复方中草药与添加抗生素对肉仔鸡的生长促进效果一致。全期结果显示各组平均日采食量均无显著差异，平均日增质量结果B组、C组、E组优于其余各组，但料质量比C组最低，其结果表明C组添加效果优于B组。唐日益等研究复方中草药添加剂（HMA）对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响，分别以连续和隔周在基础饲粮中添加2kg/THMA为试验组，结果显示复方中草药添加剂对生产性能和蛋品质均有改善作用，且连续饲喂复方中草药添加剂效果较好，本试验结果与其相似。刘砚涵等研究中草药饲料添加剂对‘北京鸭’生产性能、免疫指标及肉品质的影响，在基础饲粮中分别添加0.1％（低剂量组）、0.2％（中剂量组）及0.5％（高剂量组）的复方中草药，发现复方中草药显著提高北京鸭生长性能、屠宰性能，尤以0.2％的中草药添加量效果最好。本试验E组与G组各项生长性能检测指标均无显著差异，说明低剂量添加就可达到高剂量的添加效果。对于复方中草药的配伍及添加量还需更多有力数据支撑，复方中草药添加效果是否优于抗生素还需后续试验进行考证。

禽类的免疫器官主要有法氏囊、胸腺和脾脏，其中法氏囊和胸腺是禽类的中枢免疫器官，脾脏是禽类的次级免疫器官。免疫器官的发育状态和功能直接决定着家禽的免疫水平，其良好的发育能有效降低肉鸡的发病率，减少药物的使用，保证肉制品的质量和安全。女贞子所含的路类及苯芒醇巧类物质具有补肝补肾、清虚热的作用；板蓝根当中所含有的黄酬类和三瞄皂巧类生物活性物质具有清热解毒的作用；当归中含有的当归多糖和挥发油具有补血活血、润燥滑肠作用；柴胡中所含的皂苷能抑制各种炎症因子引起的踝关节肿胀和结缔组织增生性炎症。将其加入肉鸡基础饲粮，可有效改善肉鸡免疫器官的发育。蔡晴霞等比较4种复方中药添加剂对肉鸡生产性能与免疫性能的影响，4个试验组以拌料法和饮水法给药，测定不同日龄肉鸡免疫器官指数，结果显示复方中药2组可提高脾脏指数和胸腺指数，其结果与本试验结果基本一致。杨润霞等研究3种中药复方制剂对雏鸡免疫器官发育及免疫功能的影响，以黄芪、白术、防风等单味中药组成3组中药复方中草药制剂，分别于42、52、62日龄对试验鸡进行检测，结果显示，试验组雏鸡胸腺、法氏囊发育良好，无明显衰老症状。其结果与本试验存在差异，可能与中草药配方、基础饲粮组成及营养水平、饲养环境不同等因素密切相关。总体而言，复方中草药对肉鸡免疫器官的发育有促进作用。

IL-2又称T细胞生长因子，可以激活T细胞，促进B细胞增殖和抗体分泌以及巨噬细胞的活化。IL-6主要能刺激活化的B细胞增殖和分泌抗体，刺激肝细胞合成急性期蛋白并参与炎症反应，促进血细胞的发育。IL-8的主要生物学活性是吸引和激活中性粒细胞。中性粒细胞与IL-8接触后发生形态变化，迁移到反应部位，释放出一系列活性产物。这些作用可导致机体局部炎症，达到杀菌和细胞损伤的目的。IL-100可通过活化的T细胞抑制细胞因子的产生，因此被称为细胞因子合成抑制剂（CyTokINEsyNTHEsIsINHIBIToR，CsIF），特别是通过TH1细胞抑制IL-2、IFN-、LT等细胞因子的产生，从而抑制细胞免疫应答。TLR3信号通路可促进炎性因子的产生，在宿主抵抗活性病毒中发挥重要作用。TLR4受体在多种细胞中均有表达，例如单核巨噬细胞、中性粒细胞等。TLR可识别病毒囊膜蛋白，然后与病原分子结合，从而启动机体免疫系统，最终引起趋化因子和炎症因子的表达而发挥抗感染作用。寡糖、植物精油和微生态制剂可调节肉鸡体内部分基因IL及TLRsmRNA的表达已被多位学者早期证实，但目前关于复方中草药对肉鸡天然免疫相关基因表达的影响报道较少。马景番等探讨不结球白菜提取物（NCCE）对肉鸡脾脏细胞因子mRNA表达丰度的影响，分别在基础饲粮中添加不同剂量的NCCE，结果显示，与对照组相比，NCCE能够诱导肉鸡脾脏IL-2、IL-4及IFNγmRNA的表达，以添加500MG/kg效果最好。熊阿玲等探讨不同水平的MOS对肉鸡生长性能等的影响，天然免疫相关基因表达检测结果显示，饲粮添加MOS显著影响肉鸡组织TLR2和TLR4mRNA的表达。本试验在基础饲粮中持续添加复方中草药，肉鸡血液中IL-2、IL-6、IL-8、TLR3和TLR4基因mRNA的表达量显著高于对照组，并在试验期内呈显著上升趋势，且IL-100mRNA表达显著下降，进一步说明了中草药制剂也同样具有增强免疫的功效。

4.结论

本试验条件下，饲粮添加复方中草药可提高肉鸡生产性能、促进免疫器官的发育，且在14～42日龄添加100mL/kg复方中药制剂提取物效果最佳；持续添加复方中药制剂提取物可上调基因IL-2、IL-6、IL-8、TLR3、TLR4mRNA的表达，下调IL100mRNA的表达。

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