高效液相色谱法（四）

多元低压梯度洗脱是高效目前采用的主要控制模式。目前还有一种被称为亲水相互作用色谱法（hydrophilicinteractionliquidchromatography，液相HILIC），色谱是高效一种采用极性固定相、以高浓度极性有机溶剂和低浓度水溶液为流动相的液相色谱分离模式，能提高质谱检测的色谱灵敏度。水是高效强洗脱剂，加大乙腈比例可使极性组分保留值加大，液相适于分析极性化合物或极性代谢物。色谱亲水相互作用液相色谱法的高效梯度洗脱和反相模式相反，亦被称为反反相色谱技术，液相其保留机制与正相色谱类似；初始条件包括高比例有机相，色谱典型的高效比例为95％乙腈，然后逐步提高水相的液相比例。

低压梯度洗脱只需要一个高压泵，色谱而高压梯度洗脱就需要多个高压泵。低压梯度洗脱时流动相的配比通过比例阀控制，硬件投入成本降低，但是提高了对流动相脱气的要求。高压梯度洗脱技术在高效液相色谱技术中已逐渐被淘汰。

在农药残留分析过程中，单残留分析多采用等度洗脱，多残留分析通常需要采用梯度洗脱技术。

2、进样系统高效液相色谱通常由手动六通进样阀或自动进样器组成。

通过进样系统可以实现取样和进样两个目的。进样就是将净化好的待分析样品溶液送入色谱柱的一种装置。对进样系统的要求是：进样重复性好，进样时对分离系统的压力、流量影响小；样品在进样阀处不得因漏出、吸附、渗透而损失；取样时不能将气泡带入定量管。高效液相色谱法进样难度较大，主要原因是系统处于高压状态。在液相色谱法中，有3种进样技术：直接注射器进样、停流进样和阀进样。前两种技术由于压力过高或对分离有影响已经很少采用。目前把样品引入色谱柱中主要是通过六通进样阀。进样阀内装有定量管，样品溶液在常压下靠进样器注入定量管，并把管中的流动相顶出，再转动阀门，在保持高压不停状态下，将处于常压状态下的样品送入高压流路系统。进入分离系统的样品量控制有两种方式，一种是利用定量管切入（10μL、20μL、50μL、100μL），另一种是通过进样器。当采用定量管时，通常需要注入5～10倍定量管体积的样品量，保证阀体中的流动相被驱赶彻底。当采用进样器定量时，定量管的体积要比进样量大。通过更换大体积定量管获得较低定量限，要注意的是定量管的体积与分析色谱柱的内径成正比。定量管的体积不宜过大，否则每次进样时系统压力波动较大，峰形很差。非全量注入方式定量的重现性一般较差。

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