高效液相色谱法同时测定茶叶中6种茶多酚含量（二）

1.3.3 茶多酚标准溶液配置

分别称取对照品没食子酸、高效没食子酸儿茶素没食子酸酯、液相叶中表儿茶素、色谱时测表没食子酸儿茶素、法同表儿茶素没食子酸酯、定茶多酚表没食子酸儿茶素没食子酸酯标准品0.1g，种茶精密称定后分别置于100mL容量瓶中，含量甲醇溶液稀释至刻度，高效摇匀后即得对照品溶液1.00mg/mL，液相叶中置于-20℃冰箱中，色谱时测备用。法同

1.3.4 色谱条件选择

AgilentC18色谱柱（250mm×4.6mm，定茶多酚5.0μm），种茶流动相：A：0.3%甲酸水溶液；B：0.3%甲酸甲醇溶液；柱温：40℃；流速：1mL/min；检测波长：280nm；进样量：10μL；梯度程序：0min（85%A+15%B），含量60min（70%A+30%B），高效DAD检测器。

1.3.5 方法学测定

1.3.5.1 线性

分别取没食子酸、没食子酸儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、表没食子酸儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子酸儿茶素没食子酸酯储备液，配制成2.00、4.00、8.00、20.00、40.00、100.00μg/mL的系列标准工作液，高效液相色谱仪进样测定相应的峰面积，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数。

1.3.5.2 检测限和定量限

分别测定6种茶多酚检测限和定量限，检测限S/N为3，定量限为3倍检测限。

1.3.5.3 精密度

分别配制没食子酸、没食子酸儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、表没食子酸儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子酸儿茶素没食子酸酯标准品溶液，按实验条件，平行测定6次。

1.3.5.4 加样回收率

分别取6种茶多酚标准溶液加入1mg标准品，进行加样回收率计算。

1.3.6 供试品制备

供试品茶粉0.5g，根据最优提取方法分别制备热水浸提溶液和醇提取液各5mL，样品采用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试品溶液，置-20℃冰箱中保存备用。

2 结果与分析

2.1 单因素实验

茶叶中总酚含量随时间、温度、固液比和乙醇浓度变化见表2。根据单因素实验确定响应面法优化热水浸提条件提取时间10～50min，温度60～100℃，固液比为4～8（mL/g），乙醇提取条件为时间20～60min，乙醇浓度0%～100%，固液比为4～9（mL/g）。

2.2 响应面法优化提取工艺

2.1.1 热水提取工艺

根据响应面法优化，确定提取温度为80℃，固液比为6∶1（mL/g）；提取时间为29min，过滤取滤液，最优条件多酚含量为13.47mg/mL。

2.1.2 超声醇提取工艺

准确称取0.5g茶叶粉碎过60目筛的恒重茶粉末，根据响应面法优化，确定溶剂乙醇浓度50%，固液比6.5∶1（mL/g），提取时间40min，过滤取滤液，最优条件多酚含量为11.30mg/mL。

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