固相萃取一高效液相色谱法同时测定糕点中13种添加剂的研究（三）

3、固相高效线性关系考察

将分别精密量取的液相标准混合使用液0.1mL、0.5mL、色谱时测1.0mL、法同2.0mL、定糕点中的研2.5mL分别置5mL容量瓶中，种添加水稀释至刻度，加剂究摇匀即得标准系列1～5，固相高效线性6直接取精密量对照品储备溶液中的液相日落黄、新红0.4mL，色谱时测糖精钠、法同亮蓝、定糕点中的研诱惑红、种添靛蓝、加剂究胭脂红、固相高效山梨酸、纳他霉素各取1.0mL，赤藓红0.7mL，脱氢乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富马酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，摇匀，加水稀释至刻度。项下的标准系列按上述色谱条件进行测试，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标绘制标准线性，得到线性回归方程以及相关系数r，结果见表3。

结果表明，糕点中13种成分的线性关系良好，检测限以S/N=3进行计算，结果满足要求。

4、回收率与精密度

分别称取9份阴性样品，各2.5g，按上述色谱条件以及优化好的前处理方法，以低、中、高三个浓度水平进行添加标准混合储备液为0.3mL、1.0mL、2.5mL，添加后浓度分别约为2.4μg/mL、8.0μg/mL、20μg/mL，按上述色谱条件以及优化好的前处理方法，称取粉碎均匀的糕点样品2.5g置50mL离心管中，加25mL水，各加5mL106g/L亚铁氰化钾溶液和5mL219g/L乙酸锌溶液，涡旋10min10min后取出，量取上清液5mL过QasisWAX固相萃取小柱（预先经3mL甲醇以及3mL水活化），弃去流出液，依次用6mL2％甲酸和6mL纯化水清洗，再用5％氨化甲醇洗脱并收集于15mL离心管中，在40℃水浴中氮吹至近干后取出放置室温，用5mL水复溶残渣，过0.45μmGHP微孔滤膜后，待测。结果见表4，结果表明，糕点中13种食品添加剂平均回收率为82.1％～105.4％，RSD为小于5％（n=9），说明本次试验方法回收率与精密度良好。

5、实际样品测定

将8个批次样品分别精密量取上述精密量取精密称取新红、胭脂红、亮蓝、赤藓红、靛蓝、日落黄、诱惑红38.25mg、12.45mg、12.77mg、25.53mg、11.17mg、34.80mg、10.76mg分别置50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，得到7种人工合成色素浓度分别为：0.6801mg/mL、0.2236mg/mL、0.2339mg/mL、0.4391mg/mL、0.2011mg/mL、0.6299mg/mL、0.1857mg/mL；又分别精密称取脱氢乙酸、苯甲酸、山梨酸、纳他霉素、对照品27.88mg、18.19mg、11.45mg、10.00mg、11.78mg分别置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到4种防腐剂浓度分别为：0.5520mg/mL、0.3636mg/mL、0.2267mg/mL、0.1980mg/mL；精密称取糖精钠对照品11.78mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到1种甜味剂浓度为：0.2356mg/mL；精密称取富马酸二甲酯对照品10.29mg置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为1.0280mg/mL。

对照品储备溶液中的日落黄、新红0.4mL，糖精钠、亮蓝、诱惑红、靛蓝、胭脂红、山梨酸、纳他霉素各取1.0mL，赤藓红0.7mL，脱氢乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富马酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，摇匀，加水稀释至刻度。标准混合使用液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、2.5mL分别置5mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得标准系列1～5的标准混合使用液。结果8个批次中有5个批次检出山甲酸、2个批次检出苯甲酸，1个批次同时检出新红、山梨酸、靛蓝、脱氢乙酸、胭脂红，结果见图3，检出山梨酸的批次虽经光谱确认为阳性，但含量均在国家规定的范围内（≤1.0g/kg），检出苯甲酸的批次经光谱确认为阴性，同样也符合国家标准规定（不得检出），检出新红、山梨酸、靛蓝、脱氢乙酸、胭脂红的批次光谱确认图见图4，光谱确认图中可见只有山梨酸的样品光谱图与标准品的光谱图一致，确认检出山梨酸，含量为0.21g/kg，符合国家标准规定，针对检出的样品，本次试验也采用国标进行验证，结果与国标结果一致，说明本试验方法可靠，值得推广。

三、结论

本试验建立了一种固相萃取一高效液相色谱法同时检测糕点中13种食品添加剂的方法，本方法采用106g/L亚铁氰化钾和219g/L乙酸锌作为蛋白沉淀剂去除样品中存在干扰的蛋白基质以及糖类等基质，经WatersOasisWAX固相萃取小柱进行富集、净化，以Agilent5HC-C₁₈（2）（4.6×250mm，5μm）色谱柱进行分离，0.02mol/L乙酸铵和甲醇为流动相，梯度洗脱，PDA检测器进行定性定量检测，采用对照品光谱图对样品中假阳性样品进行确认，判定结果是否有检出。通过试验，本方法线性关系良好，回收率高，精密好，是一种能够快速并同时检测糕点中13种食品添加剂的方法本方法为食品添加剂的检测提供一定的数据支持。

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