高效液相色谱法准确定量微量植物体中的重要植物色素（二）

2.1.2 色谱柱的高效考察

由于叶绿素a和叶绿素b的检测波长相近，为清楚考察色谱柱效果，液相选用波长445 nm检测叶黄素，色谱素645 nm检测叶绿素a和叶绿素b。法准选用商品化的确定C18-AQ柱和氰基柱分别对待测样品进行分析，检测结果表明，量微量植在氰基柱上分离3种色素的物体物色保留时间较长，分离度较高，中的重植如图1所示，高效有利于叶绿素a、液相叶绿素b和叶黄素的色谱素定量检测。

2.2 方法学考察

2.2.1 标准曲线及定量限

分别配制浓度为1.2.1所述的法准系列标准工作溶液，进样后以不同浓度的确定峰面积（平均值/10000）y为纵坐标，配制的量微量植标准品的质量浓度x（mg/L）为横坐标，建立y-x标准曲线，物体物色计算回归方程，结果如表1所示，根据信噪比S/N=3，测得各组分定量限和检出限结果见表1。3种色素均在0.05～50 mg/L范围内线性极佳（R2=0.9999）。

2.2.2 方法精密度

取3种色素的混合标准品，在相同条件下重复进样测定6次。分别计算叶绿素a、叶绿素b以及叶黄素的峰面积相对标准偏差（RSD），如表2所示。3种植物色素的峰面积的相对标准偏差（RSD）均小于1%，表明方法的精密度良好。

2.2.3 方法稳定性

取同批绿叶碎片平行称取3份，按1.2.2方法对样品进行处理，于制样后的2、6、10 h分别进样分析测定3种色素的含量，测定日内精密度；连续3 d每天重复检测试样，测定日间精密度，结果示于表3。结果表明，试样的日内及日间精密度均低于5%，表明该方法的稳定性和重现性良好。

2.2.4 回收率及精密度

对3份相近浓度的试样精密量取900 μL，分别加入100 μL的标准溶液，每份样品重复分析3次。采用外标法计算平均回收率及精密度，结果表明，叶黄素、叶绿素a和叶绿素b的加标平均回收率均在90%～110%之间，RSD <5%，满足定量分析要求。

2.3 样品测定

按1.2.2方法制备绿色植物叶片以及叶片根部样品溶液各3份，分别按1.2.3方法重复分析3次，通过标准工作曲线计算植物叶片以及叶片根部样品中叶绿素a、叶绿素b以及叶黄素的含量。图2为实际植物叶片样品的色谱图（不同检测波长下），其中3种植物色素与其标准品的出峰时间可以很好地吻合。计算结果表明，按所建立的方法检测的植物叶片中叶绿素a、叶绿素b和叶黄素的含量分别为0.229、0.714、0.821 mg/g；检测的植物叶片根部叶绿素a、叶绿素b和叶黄素的含量分别为0.058、0.089、0.146 mg/g。

3 结论

针对目前植物色素分析时间长，流动相体系较为复杂，且待测组分难以达到基线分离的现状下，建立了准确测定植物叶片以及叶片根部中叶绿素a、叶绿素b以及叶黄素含量的反相高效液相色谱方法，可对植物体中重要的3种色素进行准确快速的分析。方法的线性关系、精密度、稳定性以及平均加标回收率等各项方法学参数均表明，该方法的灵敏度和准确度均符合实际样品检测过程中的要求。本研究方法的建立为植物中重要色素的定量提供了可靠、快速、准确的高通量分析方法。

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