新鲜和干制龙眼果肉多糖免疫调节活性的分析（二）

 2 结果与分析

2.1 LPX3和LPG2的新鲜性纯化

从新鲜和十制龙眼果肉中分离纯化得到LPX3和LPG2两种多糖。LPX3和LPG2的和干串联凝胶柱色谱图如图1所示。结果显示，制龙LPX3和LPG2均呈现单一对称的眼果疫调色谱峰且相对分子质量分布较窄，出峰时间分别为19.45min和26.50min，肉多表明LPX3和LPG2具有较好的糖免均一性。

2.2 LPX3和LPG2对肠系膜淋巴结细胞增殖的节活影响

南图2可知，与空白对照组相比，分析随着LPX3和LPG2质量浓度的新鲜性增加(6.25～200μg/mL)，肠系膜淋巴结细胞的和干增殖分数显著增加(P＜0.05)。当LPX3和LPG2质量浓度为200μg/mL时，制龙肠系膜淋巴结细胞的眼果疫调增殖分数分别为235.45％和227.60％，两者问无显著差异(P＞0.05)。肉多表明LPX3和LPG2均对小力更强。糖免鼠肠系膜淋巴结细胞无毒性作用，节活且能促进其增殖。

2.3 LPX3和LPG2对巨噬细胞增殖的影响

由图3可知，与空白对照组相比，随着LPXLPG2质量浓度的增加(100～400μg/mL)，巨噬细胞的增殖分数显著增加(P＜0.05)。当质量浓度为100μg/mL和200μg/mL时，LPX3和LPG2之问对巨噬细胞增殖的促进能力无显著差异(P＞0.05)。当LPX3和LPG2质量浓度为400μg/mL时，巨噬细胞增殖分数分别为135.90％和143.70％，两者间存在显著差异(P＜0.05)。结果表明，新鲜和十制龙眼多糖均对巨噬细胞无毒性作用，且具有促进其增殖的作用；在400μg/mL时，LPG2促进巨噬细胞增殖的能力更强。

2.4 LPX3和LPG2对巨噬细胞吞噬能力的影响

如图4所示，与空白对照组相比，LPX3和LPG2随着质量浓度的增加(50～400μg/mL)，巨噬细胞的吞噬分数显著增加(P＜0.05)。在LPX3和LPG2质量浓度为400μg/mL时，吞噬分数分别为192.03％和198.28％，两者问无显著差异(P＞0.05)。结果表明，LPX3和LPG2均能有效促进巨噬细胞吞噬抗原。巨噬细胞的活化在机体免疫应答过程中扮演着重要角色，吞噬能力的增强是其活化的标志之一。巨噬细胞通过吞噬清除受损细胞或外来抗原，诱导细胞分泌IL-1B、TNF-α等细胞因子调节机体免疫阻。有报道显示龙眼多糖组分和硫酸化修饰的龙眼多糖组分能显著增强巨噬细胞的吞噬能力。

2.5 LPX3和LPG2对巨噬细胞分泌NO的影响

NO作为一种重要的细胞信号分子，广泛参与细胞和机体的免疫调节。如图5所示，与空白对照组相比，NO分泌量随着LPX3质量浓度的增加而显著增加(P＜0.05)。LPG2在25～200μg/mL范同内，能显著促进NO分泌(P＜0.05)。当LPX3和LPG2的质量浓度均为200μg/mL时，NO分泌量分别为空白对照组的5.4倍和5.6倍，两者问无显著差异(P＞0.05)。结果表明，25～200μg/mL的LPX3和LPG2引起了细胞促炎信号分子NO分泌量的显著改变，可能诱导了巨噬细胞相关信号通路的激活。同时，研究显示炎症因子的过度释放会诱导机体的炎症因子风暴，对机体造成损伤，LPX3和LPG2促进巨噬细胞分泌NO的活性有待进一步研究。

2.6 LPX3和LPG2对巨噬细胞分泌细胞因子的影响

如图6所示，与空白对照组相比，LPX3和LPG2(25～400μg/mL)可诱导巨噬细胞分泌IL-6和TNF-α，并呈现出一定剂量关系。当质量浓度为400μg/mL时，TNF-α的分泌量分别为空白对照组的17.67倍(296.20pg/mL)和H31.54倍(528.65μg/mL)，两者具有显著性差异(P＜0.05)：IL-6的分泌量分别为空白对照组的18.42倍(73.69pg/mL)和27.31倍(109.22pg/mL)，两者具有显著性差异(P＜0.05)。结果表明，LPX3和LPG2均能显著促进巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6。当质量浓度为400μg/mL时，LPG2促进巨噬细胞分泌IL-6和TNF-α的能力更强。IL-6和TNF-α在宿主防御病原体和急性应激中起着关键作用。巨噬细胞IL-6和TNF-α分泌量的增加可能与细胞的激活和防御有一定关系。

3 结语

作者采用小鼠肠系膜淋巴结细胞和巨噬细胞模型，比较了LPX3和LPG2诱导细胞增殖和细胞因子分泌的活性。结果表明，LPX3和LPG2均能促进小鼠肠系膜淋巴结细胞增殖和激活巨噬细胞，且具有剂量依赖性的促进巨噬细胞吞噬和诱导细胞分泌IL-6、TNF-α。同时，与LPX3相比，LPG2表现出更强的激活巨噬细胞的活性。

多糖的生物活性与其结构密切相关，新鲜和干制龙眼果肉多糖的分子结构差异及其激活巨噬细胞的分子机制差异还有待进一步研究。

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