HPLC同时测定和胃降逆胶囊中的大黄素和齐墩果酸

目的测定采用HPLC法同时测定和胃降逆胶囊中大黄素和齐墩果酸的含量。方法采用AgilentZorbaxSB-C18色谱柱（250mm×4.6mm，和胃5μm），降逆胶囊流动相为甲醇-0.1mol·L-1磷酸溶液（85∶15），大黄梯度洗脱，素和流速1mL·min-1，齐墩检测波长210nm。果酸结果大黄素和齐墩果酸的测定峰面积与进样量间的线性关系良好，r均超过0.9993，和胃RSD不超过2%，降逆胶囊平均回收率均大于95%。大黄结论所用方法重复性好、素和回收率高，齐墩适用于和胃降逆胶囊的果酸质量控制。

和胃降逆胶囊为临床常用中成药，测定主要由朱砂七、天仙藤、赭石、老龙皮、楤木、蒲公英等药材组成，具有活血理气、清热化淤、和胃降逆的功效。处方中的朱砂七是“太白七药”中的名贵品种，主治“七劳五伤”；天仙藤具有活血止痛、利水消肿，解毒的功效；赭石可以用于胃气上逆呕吐、呃逆、噫气；楤木可发挥镇痛、抗炎、护肝等药理作用；而老龙皮具有抗氧化作用；蒲公英则具有抗肿瘤、抗氧化的功效。和胃降逆胶囊在临床上主要用于治疗多种胃炎、胃食管反流等，与其他药物联用也可治疗食欲不振

。参考课题组对于其他处方中成分的含量测定，现采用HPLC法同时测定和胃降逆胶囊中大黄素和齐墩果酸两种有效成分的方法，有利于和胃降逆胶囊的质量控制。

1实验部分

1.1仪器与试药

LC-20AT型高效液相色谱仪、ΜV-1750型紫外分光光度计。大黄素、齐墩果酸对照品（110756-201512、110709-201607）；和胃降逆胶囊方中所有药材；和胃降逆胶囊（自制，规格：0.4g）；水为纯化水；甲醇、磷酸为色谱纯；其余试剂为分析纯。

1.2方法与结果

1.2.1色谱条件

采用AgilentZORBAXSB-C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-0.1mol·L-1磷酸溶液，梯度洗脱（0～15min、30%～85%甲醇，15～30min、85%甲醇），检测波长210nm，流速为1mL·min-1，柱温为室温，进样量10μL。

1.2.2溶液的制备

参照2015年版《中国药典》中一清胶囊项下大黄的测定方法制备供试品溶液。取4粒样品内容物，研细混匀，取约1.0g，精密称定，加20mL甲醇，混匀，静置30min，滤过，滤液蒸干，残渣加10mL2.5mol·L-1硫酸溶液，超声处理（250W，50kHz）5min，转移至100mL锥形瓶中，再加15mL三氯甲烷，于70℃水浴上加热回流30min，冷却，转移至分液漏斗中，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷加热回流酸液（10mL×2），每次20min，分取三氯甲烷液，酸液再用10mL三氯甲烷振摇提取，合并三氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解残渣，转移至50mL量瓶中，加甲醇定容，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

分别对供试品溶液制备过程中的水解时间和提取次数进行了验证，以峰面积与取样量比值为评价指标，比值越大，说明水解越完全，提取越彻底。结果水解30min和提取2次后，峰面积与取样量的比值不再增加，说明已经水解和提取完全，结果与《中国药典》中的方法一致。分别精密称取0.5mg大黄素、0.7mg齐墩果酸对照品，置小烧杯中，加甲醇溶解，超声30min，使彻底溶解，冷却至室温，转入10mL量瓶中，加甲醇定容，制得大黄素、齐墩果酸终浓度分别为50、70μg·mL-1的混合对照品溶液。按照处方制备不含老龙皮、楤木和朱砂七的阴性样品，按上述方法操作，即得不含相关药材的阴性对照溶液。

1.2.3专属性的试验

分别取供试品、对照品和阴性对照溶液，在“1.2.1”项色谱条件下分别进样，记录色谱图。阴性样品在大黄素与齐墩果酸色谱峰相应的位置上未检出色谱峰，表明处方中其他药材的成分不会干扰测定（图1）。

1.2.4线性关系的考察

吸取3、6、9、12、15、18μL含大黄素与齐墩果酸的混合对照品溶液，进样测定。以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得大黄酸、齐墩果酸的回归方程为：Y1=2.0706×103X-2.6883×105（r2=0.9997）、Y2=947.08X-1.6826×105（r2=0.9998），线性范围分别为0.1533～0.9198、0.2133～1.2798μg。

1.2.5精密度、稳定性、重复性的考察

分别精密取10μL大黄素、齐墩果酸混合对照品溶液进样，共6次，记录峰面积，计算得大黄素、齐墩果酸峰面积的RSD分别0.80%、0.82%，表明精密度良好。取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10h时测定峰面积，计算得大黄素、齐墩果酸峰面积的RSD分别0.50%、0.80%，表明供试品溶液在10h内稳定性较好。取同一批样品共6份，按“1.2.2”项方法制成供试品溶液，分别精密量取10μL进样，记录峰面积，按外标法计算样品中大黄素和齐墩果酸的含量。6次含量测定的平均含量分别为2.944、4.099mg·g-1，RSD分别为1.65%、1.73%。

1.2.6加样回收率的考察

取同一批样品，共6份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入44.6μg·mL-1大黄素、296μg·mL-1齐墩果酸对照品溶液1mL，分别按“1.2.2”项方法制备供试品溶液，取10μL进样，记录峰面积，按外标法计算样品中大黄素和齐墩果酸的含量并计算回收率（表1）。回收率和RSD均在合理范围内，符合含量测定的要求。

1.2.7样品的含量测定

取3批和胃降逆胶囊，按“1.2.2”项方法制备供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积，通过外标法计算大黄素和齐墩果酸的含量。3批样品中，每粒分别含大黄素1.18、1.18、1.19mg、齐墩果酸1.63、1.63、1.64mg。

2讨论

朱砂七是和胃降逆胶囊中的主药，其主要有效成分是大黄素，而老龙皮和楤木是辅药，其主要有效成分都含有齐墩果酸，因此，选择大黄素和齐墩果酸作为含量测定的指标。大黄素是一种蒽醌衍生物，而齐墩果酸属于三萜皂苷，二者皆可溶解于甲醇中，都具有酸性，酸化滤液残渣后酸性物质以游离形式存在，再用三氯甲烷回流，大黄素和齐墩果酸会进入氯仿层，分取有机层，重复多次操作，则可充分提取样品中的大黄素和齐墩果酸。对大黄素和齐墩果酸在200～400nm扫描，在210nm处大黄素和齐墩果酸均有强吸收，因此，设定210nm为检测波长。文中所用方法操作简单、结果准确可靠，可更好地控制和胃降逆胶囊的质量。

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