劲骨胶囊功效成分鉴别及其盐酸氨基葡萄糖含量测定（一）

一、劲骨胶囊鉴别及引言

随着我国国人健康意识的功效不断提高，保健品需求量持续上升。成分由于保健品行业进入门槛不高，盐酸导致我国保健品行业一直以来就存在的氨基乱象和问题，如虚假宣传、葡萄以次充好等，糖含因此鉴别保健品中的量测功效成分是很有必要的。我国对于药品质量标准一直有鉴别项规定，劲骨胶囊鉴别及而对于保健食品还没有此项要求。功效中国药典表明，成分对药物的盐酸鉴别是标示药物，也就是氨基当鉴别药物的名称、处方是葡萄已知的时，采用鉴别实验方法用来判断其真伪。糖含它不足以确证其化学结构，不能赖以鉴别未知物，只有在药物鉴别无误的情况下，进行药物的杂质检查和含量测定才有意义。为了保证保健食品的安全性、保健功能的有效性和质量的可控性，国家食品药品监督管理总局印发了《保健食品注册审评审批工作细节》的通知，通知里指出，根据产品配方及相关研究结果等，可以确定产品鉴别方法的，应予以全面、准确的阐述。在对于保健食品注册和延续注册审评审批时，需要将产品配方中功效成分的鉴别放在重要位置。

劲骨胶囊是经国家批准的保健食品（国食健字G20060140），其主要配方是盐酸氨基葡萄糖、白芍提取物、碳酸钙、维生素K₁和维生素D₃等，经混合、灌装制成的具有增加骨密度，增强免疫力的保健功能。它的功效成分是盐酸氨基葡萄糖、白芍提取物中的芍药苷、碳酸钙、维生素K₁及维生素D₃等。其中盐酸氨基葡萄糖可治疗和预防人体所有部位的骨关节炎，可缓解和消除骨关节炎的疼痛、肿胀等症状，改善骨关节活动功能等。

目前国内外尚未检索到与劲骨康胶囊配方相同或相类似的产品鉴别方面的研究报道，只能对配方中单一原料进行检索，以期获得可供借鉴的鉴别方法。其中盐酸氨基葡萄糖在国家药品标准中有鉴别方法和分光光度法的含量测定，在GB/T20365标准中没有鉴别方法，但有高效液相色谱法的含量测定。宫艳艳等用HPLC法，XbridgeAmide柱，蒸发散射光检测器，测定保健食品中盐酸氨基葡萄糖；Su等用HPLC法，柱前衍生化，紫外检测器，测定保健食品中盐酸氨基葡萄糖；Kosman等用HPLC法，紫外检测器，测定药品中盐酸氨基葡萄糖等；Rani等用反相高效液相色谱法，紫外检测器，测定药物中氨基葡萄糖等。中国药典一部针对白芍单味药材有用薄层色谱法鉴别芍药苷的方法，但没有白芍提取物的鉴别方法。中国药典二部有碳酸钙、维生素K₁及维生素D₃单一原料的相关鉴别方法。劲骨胶囊是由多种药材、食品添加剂和辅料组成，成分复杂，干扰因素多，鉴别及含量测定相对难度较大，上述文献只能提供借鉴。针对具体的功效成分，经研究分别采用化学反应、薄层色谱及高效液相色谱法进行鉴别，并对最主要的功效成分盐酸氨基葡萄糖进行了含量测定。鉴于此，本文开展劲骨胶囊功效成分，包括盐酸氨基葡萄糖、白芍提取物、碳酸钙、维生素K₁以及维生素D₃的鉴别，和盐酸氨基葡萄糖含量测定的研究，弥补保健食品过去没有鉴别项的空白，为该产品延续注册提供研究资料，也为同类产品开展这方面研究工作，并能有效地管控产品质量提供了借鉴。

二、材料与方法

1、仪器与试剂

2695高效液相色谱仪，配有紫外（ultraviolet，UV）检测器（美国Waters公司）；AE-240分析天平（瑞士Mettler公司）；RQ-50DB超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；GF9070A电热恒温鼓风干燥箱（上海迈源实验设备厂）；SX2马弗炉（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）。
劲骨胶囊（批号190312、190313、190314无锡健特药业有限公司）；盐酸氨基葡萄糖（纯度99.9%）、白芍提取物、白芍、芍药苷（纯度99.7%）、碳酸钙（纯度100%）、维生素K₁（纯度99.3%）、维生素D₃（纯度99.5%）等对照品（中国食品药品检定研究院）；硅胶G薄层板100cm×10cm×0.25cm（青岛海洋化工厂）；甲醇、乙腈（色谱纯，上海霍尼韦尔试剂有限公司）；酒石酸甲钠、硝酸银、茚三酮、冰醋酸、正丁醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇等（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；水为超纯水。

2、实验方法

（1）盐酸氨基葡萄糖鉴别

盐酸氨基葡萄糖的结构图如图1所示。根据其结构特点，并参考国家药典委员会《中华人民共和国药典四部》中的方法进行鉴别。

①碱性酒石酸铜反应法

取胶囊内容物200mg，于10mL试管中，加水5mL溶解，作为样品溶液；取盐酸氨基葡萄糖对照品0.1mg，与样品同法制成对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物200mg，与样品同法制成阴性样品溶液。

在上述3支试管中各加入碱性酒石酸铜试液1mL，加热，观察反应颜色。

②硝酸银反应法

制法与碱性酒石酸铜反应法相同，在水溶解的3支试管中，加入数滴稀硝酸试液，使呈酸性，滴加硝酸银试液，观察反应颜色。

③茚三酮显色法

取胶囊内容物200mg，加水10mL溶解，过滤，取滤液5mL，于10mL具塞试管中，作为样品溶液；取盐酸氨基葡萄糖对照品25mg，于10mL具塞试管中，加水5mL溶解，制成对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物200mg，与样品同法制成阴性样品溶液。
在上述3支试管中，各加入茚三酮试液，0.5mL，沸水加热10min，观察反应颜色。

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