响应面法优化牛舌草多糖提取工艺及其对DNA氧化损伤的保护作用(一)
牛舌草为紫草科植物意大利牛舌草AnchusaitalicaRetiz.或琉璃苣BoragoofficinalisL.的面法地上部分,是优化艺及A氧我国新疆地区常用药材,牛舌草药材收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》维药分册,牛舌用于治疗心悸,草多失眠,糖提神志不安,取工其对头痛,化损反应迟钝,保护是作用爱维心口服液等制剂中的主药,同时,面法琉璃苣(BoragoofficinalisL.)也是优化艺及A氧一种可以食用的植物,其新鲜植物体可以作为蔬菜煮食,牛舌也可作为芳香调味料使用。草多研究表明,糖提牛舌草提取物具有抗氧化、取工其对抗癌、防治哮喘和阿尔茨海默病的作用,经预试验发现牛舌草含有丰富的多糖类成分,但目前未见深入研究报道。植物多糖具有多种生物活性,包括抗癌、降血糖等。本文着眼于对牛舌草多糖类成分的提取和含量测定,并研究了牛舌草多糖体外抗DNA氧化损伤作用,为将来进一步研究牛舌草的化学成分和药理活性奠定基础工作。 一、材料与方法 1、材料与试剂 牛舌草购自新疆维吾尔自治区维吾尔医院,由新疆医科大学药学院帕丽达教授鉴定为紫草科植物琉璃苣BoragoofficinalisL。 葡萄糖对照品(SigmaG8270,纯度>98%);鲱鱼精DNA(北京索莱宝科技有限公司,生物试剂,纯度99.5%);蒽酮(国药集团化学试剂有限公司,分析纯),硫酸(天津市永晟精细化工有限公司,分析纯);乙醇(天津市天新精细化工开发中心,分析纯);蒸馏水(实验室自制,18.2MΩ·cm-1)。 2、主要仪器设备 T6新世纪紫外可见光分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);KQ-700DV型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);HH-S4数显水浴锅(金坛医疗仪器厂);ABl04—N型电子天平(Meller—ToledoInsterLTD)。 3、方法 (1)牛舌草多糖的制备 取牛舌草粉末经3倍量石油醚回流3次,每次3h,药渣挥干后用3倍量的95%乙醇回流3次,每次3h,药渣挥干后取0.5g加蒸馏水20mL超声提取3次,每次30min,提取液过滤合并后浓缩至10mL,Sevag法(氯仿:正丁醇5∶1)除去蛋白质,加无水乙醇至80%进行沉淀,离心后得到的多糖沉淀用无水乙醇、丙酮,乙醚反复洗涤后干燥,得精制多糖。 (2)葡萄糖标准储备液的配制 精密称取葡萄糖对照品50.05mg在50mL容量瓶中用蒸馏水溶解,随后定容至刻度,得葡萄糖对照品溶液,其浓度为1.001mg/mL的。 (3)标准曲线的制备 精密吸取葡萄糖标准储备液2、3、4、5、6mL分别置于25mL容量瓶中用蒸馏水定容,各取1mL系列葡萄糖标准溶液至具塞试管中,以1mL蒸馏水作空白,硫酸蒽酮一硫酸法显色,并在620nm处测定吸光度值,以葡萄糖对照品得浓度(mg/mL)对其吸光度A进行回归后得到标准曲线,回归方程为A=28.55C+0.0062,R2=O.9995,线性范围:0.01600—0.04800mg/mL。 (4)样品溶液的配制 将牛舌草药材粉末经3倍量的石油醚和3倍量的95%乙醇分别回流3次,每次3h,脱色并除去单糖和寡糖,挥干溶剂并干燥后精密称取药材粉末0.5g置锥形瓶中,加入蒸馏水20mL,超声提取30min,提取1次,离心得牛舌草多糖样品溶液。 (5)换算因子的测定 精密称取两份精制牛舌草多糖,各10mg,在50mL容量瓶中用蒸馏水溶解后定容至刻度,精密吸取该溶液0.5mL,将牛舌草药材粉末经3倍量的石油醚和3倍量的95%乙醇分别回流3次,每次3h,脱色并除去单糖和寡糖,挥干溶剂并干燥后精密称取药材粉末0.5g置锥形瓶中,加入蒸馏水20mL,超声提取30min,提取1次,离心得牛舌草多糖样品溶液。每份溶液测定3次并按下面的公式计算换算因子: f=w/(C×D), 式中:w为多糖质量,以mg计;C为多糖溶液中葡萄糖浓度,以mg/mL计;D为多糖稀释因素,取两者平均值,测得f=1.03。 (6)多糖含量的测定 精密吸取样品溶液1mL置于10mL容量瓶中并用蒸馏水定容,混匀,取该溶液0.5mL在具塞试管中显色,在620nm处测定吸光度。多糖含量=(c×D×f)/w×100%。其中w为多糖样品的质量,以g计;f为换算因子;C为多糖溶液中葡萄糖浓度,以mg/mL计;D为多糖稀释因素。 (7)精密度实验 精密吸取葡萄糖标准溶液4mL在25mL容量瓶中稀释定容,并取该溶液1mL在具塞试管中显色,重复测定6次,RSD为0.23%,表明仪器精密度良好。 (8)稳定性实验 按样品溶液制备方法制备一批样品,分别测定0、1、2、3、4、5、6h的吸光度,计算多糖含量,RSD为2.33%,表明样品溶液6h内稳定。 (9)重复性试验 根据精密吸取葡萄糖标准储备液2、3、4、5、6mL分别置于25mL容量瓶中用蒸馏水定容,各取1mL系列葡萄糖标准溶液至具塞试管中,以1mL蒸馏水作空白,硫酸蒽酮一硫酸法显色,并在620nm处测定吸光度值,以葡萄糖对照品得浓度(mg/mL)对其吸光度A进行回归后得到标准曲线,回归方程为A=28.55C+0.0062,R2=O.9995,线性范围:0.01600—0.04800mg/mL。项下的方法制备10份样品溶液,测定各溶液中的多糖含量,其RSD为2.11%,表明方法精密度良好。 (10)加样回收率试验 (11)响应面法优化实验设计 选取料液比,提取时间,超声功率,提取次数四个因素,在单因素实验的基础上利用Design—Expert8.0.6软件设计四因素三水平实验,各因素和水平如表2中所示,响应面设计和实验结果如表3中所示。 声明:本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系 相关链接:鲱鱼精,蒽酮,葡萄糖,硫酸
- 最近发表
- 随机阅读
-
- 天长法院开展春节走访慰问活动_
- “京”彩大课堂 快乐成长——北京市中小学生京剧小使者活动通知
- 切实做好高层住宅安置小区消防安全管理和整治工作
- 黄维院士:科研评价要过好三道关—新闻—科学网
- 南开大学率中国队获得亚洲物理奥赛7金1银
- 青岛首个四季开放冰雕馆开幕新闻发布会举行
- 广州 国庆假期化妆品、服装鞋帽、食品消费纠纷增多
- 打破传统 一批基层工人被认定为泉州市高层次人才
- 省“暖冬行,爱传递”系列主题志愿服务活动把温暖送到地震灾区
- 新北核一廠旁火燒山 疑廟宇進香放爆竹意外引燃
- 全国大学生模拟政协提案大赛落幕,清华、首都医科大学获一等奖
- 海尔发布场景商务平台,食品更安全
- 甲醇中灭多威溶液标准物质:助力农药残留精准分析
- 游客休息凳现垃圾 ,景区环保工作将进一步完善
- 安徽加速推进 “县城通”高速攻坚行动_
- 5月大男嬰染腸病毒併發重症! 吃冰能治療腸病毒嗎?食藥署闢謠!
- 不可忽视的沙门氏菌:夏秋季为感染高峰期,儿童感染占比较高
- 汉阴县恒大小学开展“好书分享,馥郁书香”跳蚤书市活动
- 需求大增、钢价回暖 青岛钢材前四月出口量增47.7%
- 金7乐夏季又发大招 派奖四百万
- 搜索
-
- 友情链接
-