蒙药砂蓝刺头定性与定量质量控制方法研究（一）

目的蒙药 建立砂蓝刺头Echinops gmelini的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法,砂蓝以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶1∶1∶0.8)为展开剂对砂蓝刺头花中1-甲基-4-甲氧基-8-(β-D-葡萄吡喃型糖苷)-2(1H)-喹啉酮(MMQ)进行定性鉴别；建立砂蓝刺头HPLC指纹图谱,并对MMQ的含量测定方法进行研究。

结果 建立的定性定量TLC方法对照品斑点清晰,分离度好；建立的指纹图谱分析方法能够区分砂蓝刺头与近源植物,标定了8个特征峰,并指认出其中4个成分。定量方法测定结果显示MMQ在2.024～151.800μg/mL呈良好线性关系,质量平均加样回收率为101.54%,RSD为1.46%。7批样品中MMQ的控制质量分数为0.13%～0.53%。结论 建立的研究质量控制方法科学、可靠,蒙药可为砂蓝刺头质量标准的建立提供实验依据。

菊科蓝刺头属Echinops L.植物在全世界有120余种，砂蓝分布于南欧、定性定量北非和中亚。质量我国有19种，控制主要分布于我国东北、研究华北及西北地区。蒙药蓝刺头属植物中含有有机酸类、砂蓝噻吩类、定性定量黄酮类和生物碱类等化学成分。该属植物多数有药用价值，在我国中医药或者少数民族医药中均有所应用，具有抗肿瘤、降血糖、抗炎、抗氧化等多种药理活性。

砂蓝刺头E.gmelini Turcz.为民间常用药材，在辽宁、吉林、内蒙古、宁夏、陕西、甘肃、青海、新疆等省区沙漠地区均有分布。其药用部位包括干燥根、头状花序以及全草。根为常用中药，具有清热解毒、通乳、排脓的功效，多入汤剂。在蒙医中，全草具有止血、安胎、舒筋通脉的功效；头状花序有固骨质、接骨愈伤、清热止痛之效，可治疗骨折、骨热、刺痛以及疮疡等疾病。

相关研究主要集中在砂蓝刺头植物的化学成分提取分离以及生态资源等方面。未见关于砂蓝刺头花的有效成分和质量评价的研究报道。本课题组前期从砂蓝刺头花（简称EGT）中分离得到了1-甲基-4-甲氧基-8-(β-D-葡萄吡喃型糖苷)-2(1H)-喹啉酮（1-methyl-4-methoxy-8-(β-D-glucopyranoside)-2(1H)-quinolinone，以下简称MMQ）。以其为指标，建立EGT的薄层鉴别和含量测定方法，并结合指纹图谱进行多成分定性评价，从而达到对EGT的定性和定量控制的目的。

1 材料

1.1 仪器

Linomat-Ⅵ型薄层色谱自动点样器（瑞士CAMAG公司）、Reprostar 3型薄层色谱摄像仪（瑞士CAMAG公司）、Mettler AE200型电子分析天平、KQ-250DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、Waters e2695 HPLC色谱仪、SX2-4-10型系列箱式电阻炉（上海阳光实验仪器）。

1.2 试药

EGT样品S1（批号20180823）、S2（批号20180830）、S6（批号20180901）、S7(20180905），均采集于内蒙古通辽；S3（批号20180811）采集于内蒙锡林郭勒；S4（批号20180811）采集于内蒙锡林浩特；S5（批号20180905）采集于内蒙科左中旗；S8（批号20120814）和S9（批号20120815），采集于甘肃张掖；大蓝刺头花样品S10（批号20110730），采集于新疆阿勒泰；硬叶蓝刺头花样品S11（批号20120801），采集于新疆阿勒泰，S12（批号20110725）和S13（批号20120728）采集于新疆乌鲁木齐；全缘蓝刺头花样品S14（批号20120801）和S15（批号20110731）采集于新疆阿勒泰；蓝刺头花样品S16（批号20101110）采集于内蒙古。以上药材经上海中药标准化研究中心吴立宏研究员分别鉴定为砂蓝刺头E.gmelini Turcz.、大蓝刺头E.talassicus Golosk.、硬叶蓝刺头E.ritro L.、全缘蓝刺头E.integrifolius Karet Kir.和蓝刺头E.latifolius Tausch.的干燥头状花序。MMQ对照品由实验室自制，HPLC面积归一化法，质量分数大于98%。乙腈（色谱纯，美国Fisher公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 MMQ的分离与制备

取EGT药材1.2 kg,95%乙醇回流提取3次、60%乙醇回流提取1次，提取1～2 h，回收乙醇。将浓缩液依次用石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取，合并并回收各有机溶剂。取正丁醇部位过MCI小孔树脂，依次用不同浓度甲醇水体系洗脱，取30%甲醇段减压浓缩后得浸膏5 g，通过硅胶和MCI等手段，分离得到目标化合物。经1H-NMR、13C-NMR鉴定，确定该成分为生物碱类化合物MMQ，经HPLC面积归一法测定其质量分数大于98%。

2.2 薄层色谱鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备

取EGT粉末（过3号筛）0.25 g，加70%甲醇25 m L，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加70%甲醇2 m L使溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备

取MMQ适量，加甲醇制成质量浓度为1 mg/m L的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 薄层色谱分别吸取供试品溶液和对照品溶液

各5μL，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶1∶1∶0.8）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。采用上述色谱方法对7批不同产地的EGT药材（S1～S7）进行薄层色谱鉴别（S8、S9因采集时间较久，未采用），结果样品中MMQ分离度较良好，斑点清晰，比移值（Rf）合适，并且7批药材具有良好的一致性，见图1。

2.3 指纹图谱的建立

2.3.1 供试品溶液的制备

取EGT样品（S5，过3号筛）0.25 g，精密称定，置100 m L具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 m L，称定质量，超声（功率250 W，频率40 k Hz）处理30 min，放冷，用70%甲醇补充减失质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

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