肠道集聚性大肠埃希氏菌菌体和gDNA标准物质的研制 （四）

2.5标准物质的肠道肠埃稳定性检测结果

2.5.1运输稳定性结果

将所制备的EAEC菌体标准物质分别存放于25℃和37℃条件下，于1、集聚菌菌3、性大希氏5、体和7天各抽取3个样品，标准通过螺旋涂布进行菌落计数。物质计数结果如表5所示，肠道肠埃EAEC菌体标准物质在25°C条件下保存7天稳定性良好，集聚菌菌在37℃环境下5天内稳定情况良好，性大希氏第7天活菌数量下降出现不稳定现象，体和但菌含量仍能维持在103CFU/样品水平条件，标准即满足定性样品的物质要求。

对分别在25℃和37℃条件下存放14天的肠道肠埃3个EAECgDNA标准物质样品进行特征性基因检测，PCR产物电泳结果如图3所示，集聚菌菌astA、性大希氏aggR、pic基因均能扩增出清晰的条带。说明EAECgDNA标准物质在25°C和37℃条件下保存14天稳定性良好。

上述数据表明，EAEC菌体标准物质和gDNA标准物质在非高温季节，可以常温运输，而在高温季节可以采用泡沫箱加冰袋的方式进行低温运输。

2.5.2储藏稳定性结果

将制备的EAEC菌体标准物质于-20℃和4℃保存。选择4℃保存7、14和28天，-20℃保存28和60天，分别对EAEC菌含量进行检验。通过与0天时的数据比较计算复苏率，从而评价储藏稳定性。由表6数据可以看出，-20℃保存60天复苏率为100%，表明-20℃作为标准物质的储藏条件可以满足稳定性要求。4℃条件下，保存14天复苏率为95.6%，28天复苏率为78.2%，样品中菌含量仍保持在103CFU/样品水平，样品仍然稳定，说明4℃可以作为短期储存条件。

对分别在-20℃和4℃条件下存放60天的3个EAECgDNA标准物质样品进行特征性基因检测，PCR产物电泳结果如图4所示，EAECgDNA标准物质在-20°C和4℃条件下保存60天均能对astA、aggR、pic基因扩增出特异性条带。说明-20℃和4℃满足gDNA标准物质的储藏条件。

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