同步荧光法测定蔬菜中维生素E含量

维生素E作为一种天然抗氧化剂，同步具有清除体内自由基、荧光维持细胞膜的法测完整和正常功能以及防止脂质过氧化等生理功能，蔬菜是定蔬人体摄取维生素E的主要来源，测定蔬菜中维生素E的菜中含量，对于评价它的维生营养品质具有重要意义。

测定维生素E的含量方法主要有比色法、薄层法、同步荧光法、荧光气相法、法测高效液相色谱法等，定蔬比色法操作比较简单，菜中但灵敏度较低;高效液相色谱法分辨率高，维生但操作复杂，含量成本高，同步对于大批量样品测定比较困难;荧光法特异性强，干扰少，灵敏，快速，简便，对于测定大批量蔬菜中的维生素E是一种比较理想的方法。但普通荧光光谱法存在萃取剂石油醚对维生素E有干扰，使测定结果准确性低的缺点。本实验探讨了采用同步荧光光谱法测定蔬菜中维生素E，该方法消除了石油醚的干扰，提高了实验的准确性。

1实验部分

1,1试剂与仪器

维生素E(Sigma公司，进口分装)，用时未经进一步纯化，溶于无水乙醇。其他试剂均为国产分析纯，所用溶液均用二次去离子水新鲜配制。

日立F-4500型荧光分光光度计(日本日立公司)。

1,2样品的制备与光谱测定

维生素E采用周松的方法提取。吸取一定量的维生素E提取液于20mL棕色带塞试管中，加入5.0mL分析纯石油醚振荡1min，静置分层后(如有乳化现象，加少许无水乙醇)，用注射器移去下层，上层石油醚分别用蒸馏水洗涤2～3次固定激发波长λex=295nm，在λem=300～500nm扫描维生素E普通荧光光谱;固定Δλ=30nm，λex=200～400nm下，测定同步荧光光谱，记录其λex=295nm处的荧光值。

2结果与讨论

2,1维生素E的激发光谱和荧光光谱

用含维生素E2.0mg/L的标准乙醇溶液作校正光谱多次实验表明，维生素E的激发光谱和发射光谱均为λex295nm/λem327nm，结果见图1和图2，与项光华、李艳飞等人的报道相符。

2,2石油醚和维生素E的荧光光谱、同步荧光光谱

按照实验方法，扫描石油醚和维生素E(10.0mg/L)的荧光光谱和同步荧光光谱并进行比较，结果发现，溶剂和维生素E在λem=327nm处荧光发射光谱相互重叠(图3)。从两者的同步荧光光谱可以看出，同步荧光法使2种物质分别在λ=250nm和λ=290nm处有最大发射(Δλ=30nm)，从而消除了石油醚对维生素E测定的影响(图4)。

2,3不同Δλ对维生素E同步荧光光谱的影响

采用同步荧光法测定蔬菜中的维生素E时，光谱形状不仅与物质本性有关，且与Δλ有关，Δλ越小，形成的同步光谱峰数越小、峰形越窄，但Δλ不能太小，只有当Δλ与发射峰、激发峰之间的波长相匹配时，才能产生比较强的荧光信号。2峰的分离情况通常用分离度R表示，当R<1时，2峰有部分重叠;R≥1时，表示2峰能明显分离，满足分析要求;R=1.5时，表示2峰能完全分离。

本实验分别测定了Δλ为10、20、30、40、50nm时维生素E和溶剂的同步荧光光谱，从图5和表1可以看出，Δλ为10、20、30nm时，随着Δλ的增加，同步荧光的荧光强度逐渐增强且三者R>1，综合图5和表1，Δλ=30nm时，维生素E的同步荧光光谱的荧光强度最大，且能够与溶剂的荧光光谱分离开，因此在实际测定中选择了Δλ为30nm。

         
2,4线性范围

将维生素E标准液配制成不同质量浓度的系列溶液，按上述测定方法进行测定，结果表明，其质量浓度在0.01～10mg/L内与其荧光强度成线性关系(图6)，回归方程为I=16.173ρ+1.1235，I为荧光强度，ρ为质量浓度，相关系数r=0.9995，检出限为0.0025mg/L。

2,5回收实验

取同等质量的油菜样品，分别加入一定量的维生素E的标准溶液，按上述测定方法分别进行处理、测定，计算样品中维生素E的回收率(表2)。从表2可以看出，回收率为101.18%～101.58%，平均回收率为101.37%。

2,6实际样品的测定

用上述的实验方法测定实际样品中维生素E的含量，测定结果见表3，从表3可以看出，相对标准偏差为2.4%，1.17%，说明实验的重复性较好，实验结果比较满意。

3小结

通过荧光光谱学对蔬菜中维生素E含量研究表明，以石油醚作萃取剂时，普通荧光光谱法不能够消除萃取剂对维生素E的干扰，采用同步荧光光谱法，当Δλ=30nm时维生素E的荧光强度最强，且能消除萃取剂石油醚的干扰作用。而且在0.1～10mg/L内荧光强度和维生素E浓度呈线性关系，回归方程为I=16.17ρ+1.1235，相关系数r=0.9995，样品的平均回收率为101.37%，实际样品测定结果的相对偏差(RSD)<5，0%，该法操作简便，快速，准确性高，重复性好，对大批量测定蔬菜中维生素E不失为一种理想的方法。

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