马香苓口服液中白术内酯Ⅲ含量测定方法的建立（一）

为建立高效液相色谱法(HPLC)测定马香苓口服液白术内酯Ⅲ含量的马香方法，用色谱柱为ZORBAX SB-C18，苓口立以水和甲醇为流动相梯度洗脱，服液方法流速0.8 mL/min，中白酯Ⅲ柱温25℃，术内检测波长223 nm，含量进样量30μL。测定结果显示，马香白术内酯Ⅲ检测质量浓度在0.57μg/mL～73.00μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的苓口立线性关系(y=1.356 7x+0.857 6，R2=0.992，服液方法n=6)，中白酯Ⅲ精密度、术内重复性、含量稳定性试验的测定平均相对标准偏差(RSD)分别为2.00%、8.58%和6.00%；加样平均回收率为98.04%，马香RSD=11.89%，回收率良好。该方法准确稳定，简便可行，能够很好的控制马香苓口服液白术内酯Ⅲ的含量，也为该制剂质量控制提供了一种有效的方法。

马香苓口服液是由广藿香、白术、马齿苋等制成的纯中药口服液，临床主要用于治疗病毒引起的仔猪腹泻。研究表明，该制剂工艺稳定可行，无刺激性，治疗仔猪腹泻总有效率达96%，治愈率达90%。为进一步控制该制剂的质量，便于临床药效学研究，故对该方剂做其定量的方法研究。白术具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎之功效；用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安。在马香苓口服液中作为臣药，它的主要成分作用为白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ和苍术酮等，该类成分具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的作用，也是控制白术药材质量的主要指标之一。据报道，其白术内酯Ⅲ含量可以作为评定中药散剂、口服液水提工艺等指标。因此，采用高效液相色谱法(HPLC)测定本制剂中白术内酯Ⅲ的含量并做方法学研究，可以为该制剂的质量标准提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物与试剂

白术内酯Ⅲ(含量99.9%，20 mg， 批号：11978-201501)，中国食品药品检定研究院产品；马香苓口服液，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所研制(批号20160324、20160616、20160623、20160625、20160704、20160705、20160712、20160714、20160717、20160721)；甲醇(色谱纯，规格1 L，批号20161006)，天津川普伟业科技有限公司产品；水为超纯水，石油醚(60℃～90℃，批号20160901)烟台市双双化工有限公司产品；其余有机试剂均为分析纯。

1.1.2 仪器与设备

DIONEX UItiMate 3000高效液相色谱仪，美国赛默飞世尔科技公司产品；NewClassic MS 电子天平，梅特勒-托利多上海有限公司产品；Milli-Q型超纯水机，美国Millipore公司产品；KQ 3200DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司产品。

1.1.3 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18(5 μm×4.6 mm×250 mm， 美国Agilent Technologies)，以水和甲醇为流动相梯度洗脱(表1)，流速0.8 mL/min， 柱温25℃，检测波长223 nm， 进样量30 μL。

1.2 方法

溶液制备：以甲醇和500 mL/L甲醇水溶液为空白溶液。精密称取白术内酯Ⅲ1.46 mg， 置2 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，密封，摇匀，即得浓度为0.73 mg/mL的对照品储备液。精密移取白术内酯Ⅲ标准储备液1 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成浓度为0.073 mg/mL，作为白术内酯Ⅲ对照溶液。量取中药口服液25 mL于125 mL分液漏斗，加石油醚(60℃～90℃)振摇提取4次，每次40 mL，收集上层石油醚有机溶液，水浴挥干(水浴锅温度90℃)，残渣加500 mL/L甲醇水溶液使其溶解，并定容至10 mL容量瓶，即得供试品溶液。取按处方比例并以同样制备工艺的缺白术的阴性对照口服液，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。

2 结果

2.1 专属性试验

取空白、对照品、供试品和阴性对照溶液，过0.22 μm有机微孔滤头于1 mL进样瓶中，密封，参照文献并按色谱条件自动进样测定，每个样品进样2次，记录色谱图(图1)，结果白术内酯Ⅲ对照品溶液理论板数为13327；在与白术内酯Ⅲ对照品溶液色谱峰对应的位置上，供试品(26.063 min)与其对照品(26.419 min)保留时间一致，其理论塔板数为21420，且与其他组分分离度大于1.5；阴性对照溶液在对照品与供试液相应的保留时间内未检出色谱峰，表明样品中其他成分不干扰白术内酯Ⅲ的测定。

2.2 线性关系考察

精密量取白术内酯Ⅲ对照液1 mL于2 mL容量瓶，加色谱甲醇定容至刻度，依次进行倍比稀释得系列标准溶液，其浓度分别为73.00、36.50、18.25、9.13、4.56、2.28μg/mL，按色谱条件自动进样上述系列溶液各30 μL，每个浓度进样2次，记录色谱图并测定峰面积。以白术内酯Ⅲ峰面积(y)纵坐标，检测质量浓度(x，μg/mL)为横坐标进行线性回归(图2)，得回归方程y=1.356 7x+0.857 6，R2=0.992，结果表明，白术内酯Ⅲ检测质量浓度在0.57 μg/mL～73.00 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.3 精密度试验

精密量取对照品溶液，按色谱条件自动进样30 μL，连续进针6次，记录色谱图，测定峰面积。计算结果保留时间RSD=3.04%，相对峰面积RSD=2.00%，表明仪器精密度良好。

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