HPLC法同时测定氢溴酸右美沙芬糖浆中主药和降解杂质及防腐剂的含量（一）

目的法同腐剂

建立同时测定氢溴酸右美沙芬糖浆中主成分氢溴酸右美沙芬、杂质5-羟甲基糠醛及防腐剂苯甲酸、时测沙芬羟苯乙酯含量的定氢的含高效液相色谱方法。

方法

色谱柱为PhenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，溴酸5μm），右美药和流动相为甲醇-0.1mol·L-1磷酸二氢铵溶液，糖浆梯度洗脱，中主杂质体积流量为1.0mL·min-1，降解及防柱温为30℃，法同腐剂检测波长为279nm，时测沙芬进样体积为20μL。定氢的含结果：氢溴酸右美沙芬、溴酸5-羟甲基糠醛、右美药和苯甲酸、糖浆羟苯乙酯的中主杂质线性范围分别为29.21～876.2、1.94～58.29、27.08～812.4、5.85～175.4μg·mL-1（r≥0.9997）。4种成分的平均加样回收率分别为99.23%、98.86%、100.3%、98.51%，RSD分别为1.03%、1.52%、1.11%、1.64%（n=6）。

结论

该方法简便、准确，可用于测定氢溴酸右美沙芬糖浆中氢溴酸右美沙芬、5-羟甲基糠醛、苯甲酸和羟苯乙酯的含量。

氢溴酸右美沙芬糖浆为中枢性镇咳药，可抑制延脑咳嗽中枢而产生镇咳作用，长期服用无成瘾性和耐受性。该药现行质量标准为国家药品标准WS1-（X-341）-2003Z，收载于《国家食品药品监督管理局国家药品标准新药转正标准》（第45册），该标准中只有主成分氢溴酸右美沙芬的含量测定，并未对杂质和防腐剂进行质量控制。

《中国药典》2015年版四部规定糖浆剂中含蔗糖量应不低于45%，因此本品中含有高浓度的蔗糖，极易产生糖的降解杂质5-羟甲基糠醛（5-HMF）。5-HMF属于2类遗传毒性杂质，具有致突变性、致敏性和遗传毒性等多种毒副作用。目前遗传毒性杂质已成为药品监管机构、制药企业和医疗机构关注的焦点。

氢溴酸右美沙芬糖浆处方中还含有防腐剂苯甲酸或羟苯乙酯，防腐剂虽能够抑制微生物在糖浆剂中生长和繁殖，但过量摄入对人体也会有一定的毒性，尤其是儿童用药，如苯甲酸会损害神经系统、具有细胞毒性和致癌等。羟苯酯类影响男性生殖系统和诱发女性乳腺癌等，故有必要对氢溴酸右美沙芬糖浆中的降解杂质和防腐剂的含量进行质量控制。本研究建立HPLC法同时测定氢溴酸右美沙芬糖浆中的氢溴酸右美沙芬、5-羟甲基糠醛、苯甲酸和羟苯乙酯的含量，有利于提高本制剂的质量控制标准。

1仪器与药品、试剂

1.1仪器

Waters2695高效液相色谱仪（含二极管阵列检测器）；WatersEmpower色谱工作站；SartoriusBP211D型电子分析天平；KH-700DE型数控超声波清洗器。

1.2药品与试剂

氢溴酸右美沙芬、5-羟甲基糠醛、苯甲酸、羟苯乙酯对照品（纯度分别为94.8%、99.2%、99.9%、99.9%，批号分别为100201-201204、111626-201912、100419-201703、100847-201604）；氢溴酸右美沙芬糖浆（厂家A，190202、190602、190802、200103，规格0.15%；厂家B，190205、190301、190411、190502，规格0.2%）；甲醇为色谱纯；磷酸二氢铵、磷酸为分析纯；水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：PhenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇（A）-0.1mol·L-1磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵11.5g，加磷酸1mL，用水稀释至1000mL）（B）；梯度洗脱（0～10min，15%A；10～11min，15%A→50%A；11～26min，50%A；26～27min，50%A→15%A；27～35min，15%A）；检测波长：279nm；柱温：30℃；体积流量：1.0mL·min-1；进样体积：20μL。

2.2溶液的配制

2.2.1混合对照品溶液

分别精密称取氢溴酸右美沙芬、5-羟甲基糠醛、苯甲酸、羟苯乙酯对照品适量，用甲醇-水（1∶1）溶解配制成1.4604、0.09715、1.3540、0.2924mg·mL-1的混合对照品储备液；精密量取该储备液2mL，置10mL量瓶中，甲醇-水（1∶1）定容至刻度，摇匀，制成每毫升分别含上述成分0.2921、0.01943、0.2708、0.05848mg的混合对照品溶液。

2.2.2供试品溶液

精密量取供试品5mL，置25mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）适量，超声处理10min，使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过即得。

2.2.3阴性样品溶液

以溶剂甲醇-水（1∶1）作为阴性样品溶液。

2.3专属性考察

取上述混合对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，结果见图1。

检测表明，5-羟甲基糠醛、苯甲酸、氢溴酸右美沙芬、羟苯乙酯均能达到基线分离，待测成分色谱峰的理论塔板数均大于3000，各成分之间无干扰，证明该方法专属性良好。

2.4线性关系考察

精密量取混合对照品储备液0.2、0.5、1、2、4、6mL，分别用甲醇-水（1∶1）定容于10mL量瓶中，摇匀，即得系列混合对照品溶液。按“2.1”项的色谱条件对上述系列混合对照品溶液进行测定，并绘制出横、纵坐标分别为质量浓度（μg·mL-1）和峰面积（Y）的标准曲线，得氢溴酸右美沙芬、5-羟甲基糠醛、苯甲酸和羟苯乙酯的回归方程及线性范围（n=6），分别为Y=6.6002×103X-2.2593×104（r=0.9998，29.21～876.2μg·mL-1）；Y=1.3768×105X-3.2880×104（r=0.9997，1.94～58.29μg·mL-1）；Y=7.3378×103X-1.8058×104（r=0.9998，27.08～812.4μg·mL-1）；Y=3.2497×104X-2.3063×104（r=0.9997，5.85～175.4μg·mL-1）。

2.5进样精密度试验

取混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，连续进样6次，记录峰面积，结果氢溴酸右美沙芬、5-羟甲基糠醛、苯甲酸和羟苯乙酯峰面积的RSD分别为0.32%、0.46%、0.26%、0.37%，表明仪器精密度良好。

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