HPLC法同时测定医用橡胶中4种添加剂（一）

医用橡胶密封件的法同制备过程一般包括混炼、压、时测压出、定医硫化、用橡冲切、胶中加剂清洗、种添包装等工序，法同其中，时测硫化工艺是定医将线性聚合物通过插入交联分子链，形成空间网状大分子。用橡硫化体系包括硫化剂、胶中加剂促进剂、种添活化剂以及填料、法同炭黑增强剂等添加剂合集，时测橡胶经硫化后可增强其抗撕裂强度、定医拉伸强度、弹性、韧性及抗压缩变形性以延长橡胶的使用寿命。

2-巯基苯并噻唑(2-mercaptobenzothiazole，1)是应用最为广泛的一类噻唑类促进剂，但是近年来，其毒性受到毒理学家的广泛关注。2006年，美国产品质量研究院(productqualityresearchinstitIlte，PQ刚)发表的“鼻吸入制剂可提取物与浸出物安全关注阈值和最佳解决方案”中定义并解释了安全关注阈值(safetyconcernthreshold，SCT)的概念，指出一些特殊化合物不适合采用SCT值计算安全阈值，应采取更加灵敏的检测仪器和方法，其中就包括1。由l衍生出的次磺酰胺类促进剂是目前世界上使用最为广泛的促进剂，具有与噻唑类促进剂相同的促进基，同时增加了防焦基和活性基。据文献报道，次磺酰胺类促进剂热分解后可释放出l，并与脂肪酸锌盐活化剂形成活性促进剂络合物以加速硫化进程。

本试验采用HPLC法同时测定橡胶中的l、2-巯基苯并咪唑(2-mercaptobenzimidazole，2)、苯并噻唑(benzothiazole，3)、2-甲硫基苯并噻唑(2-methylmercaptobenzothiazole，4)，以期为4种添加剂在医用橡胶制品中的含量测定与其在药品中的安全风险提供参考。

一、仪器与试药

LC-20AD型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；NV-1lOO型旋转蒸发仪(上海爱明仪器有限公司)；OrganomationN-EVAPl2型氮吹仪(美国Organomation触sociates公司)；HLB固相萃取小柱(美国Watcrs公司)。

1对照品(纯度99.6％，批号NCVWD)、2对照品(纯度＞98.0％，批号KLJ50-GN)、3对照品(纯度96％，批号RTZFE.GM)、4对照品(纯度＞98.0％，批号FZH01-ASBC)均购于日本TCI公司；甲醇、乙腈、二氯甲烷均为色谱纯，均购于上海沃凯生物技术有限公司；其他试剂均为分析纯，均购于国药集团化学试剂有限公司：胶塞(企业B，规格φ20，批号l809308)；三元乙丙(EthylenePropyleneDieneMonomner，EPDM)卡箍密封圈(企业C，规格φ38)。

二、方法与结果

1、色谱条件

色谱柱TC-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相A为5mmol／L磷酸二氢钾溶液，B为乙腈：甲醇(9:1)，梯度洗脱(旺8min，A75％；8-12min，A75％-40％：12-25min，A40％：

25-27min，A40％-75％；27L-35min，A75％)；流速1.0ml／min；柱温40℃；检测波长300nm；进样量20μl。

2、溶液配制

（1）对照品溶液的配制

对照品溶液：分别精密称取l、2、3、4对照品25.1、25.3、266.4、25.3mg各置于10ml量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得对照品溶液。

高浓度混合对照品溶液：分别移取对照品溶液0.6、1.0、0.6、0.6ml置10ml量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀后即得高浓度混合对照品溶液。

低浓度混合对照品溶液：分别移取对照品溶液1.7、0.5、1.7、1.7ml置100ml量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀后即得低浓度混合对照品溶液。

（2）模拟溶剂

模拟溶剂I：0.00lmol/L盐酸溶液。

模拟溶剂II：纯化水。

模拟溶剂III：lmmol／L氢氧化钠溶液。

模拟溶剂Ⅳ：15％乙醇溶液。

（3）供试品溶液的配制与前处理

受控提取供试液的制备：取橡胶材料约1.0g，剪碎，置于中硼硅玻璃瓶内(规格100m1)，加入二氯甲烷40ml后密封，(16士5)℃超声波水浴提取30min，取出放冷，过滤，采用适量二氯甲烷荡洗容器，滤液及洗液置于100ml量瓶中，同法提取2次，合并滤液并定容，得材料提取液。

受控提取供试液的前处理：取上述材料提取液2ml于lOml具塞刻度试管中，用甲醇稀释至4ml，即得受控提取供试液，同法制备空白溶液。

模拟提取供试液的制备：(1)胶塞：以模拟溶剂I～Ⅳ为提取溶剂，分别按每西林瓶10ml灌装，加待测胶塞，压铝盖，倒立放置，121℃高压灭菌lh，放冷至室温，将各提取液分别合并至烧杯内，得胶塞供试液I～Ⅳ，同法制备空白。(2)EPDM卡箍密封圈：以模拟溶剂I～Ⅳ为提取溶剂，将EPDM卡箍密封圈装入管道中，灌装，密封，60℃高温烘箱放置24h，取出放冷，得EPDM卡箍密封圈供试液I～Ⅳ，同法制备空白。

模拟提取供试液的前处理：取上述模拟提取供试液I～Ⅲ各25ml，分别加入6mol／L盐酸溶液20、40、80μl，调至pH1.8～2-3，混匀。取甲醇、水各5ml依次活化固相萃取小柱，提取液以流速1.5～2ml／min通过固相萃取小柱，取水20m1淋洗，甲醇4ml洗脱，收集洗脱液于5ml具塞刻度试管，用甲醇定容，即得。取供试液Ⅳ10ml，加入6mol／L盐酸溶液100μl，调至pH1.2～1.5，加入氯化钠4g吸水，加入甲基叔丁基醚2ml，涡旋3min，取上清液于10ml具塞刻度试管中，萃取3次，合并上清液，40℃水浴，氮吹至0.5ml，甲醇定容至2m1，即得。

3、受控提取因素考察

以乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、正己烷为提取溶剂，考察采用回流、超声2种提取方式对胶塞中目标待测物提取效率的影响。结果显示胶塞中只能检测出2，如图1所示，当二氯甲烷与甲基叔丁基醚作为提取溶剂时，提取效率较高，且回流与超声提取效率相当。故本研究以二氯甲烷、甲基叔丁基醚为溶剂，进一步考察回流温度对提取效率的影响。结果如图2所示，对于二氯甲烷和甲基叔丁基醚，温度对其提取效率的影响不显著，高于沸点20℃左右即可达到最大提取效率。虽然超声提取操作简便、提取时间较短，但其在超声过程中产热不均、温度难以控制。为了解决上述问题，本试验通过使用循环水控温的措施，使超声过程中温度维持在(16士5)℃，确定以二氯甲烷超声提取为最佳提取方式。

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