药用石斛属植物石斛碱研究进展（二）

2石斛碱含量分布规律

作为金钗石斛总生物碱中最主要的药用研究特征性成分，石斛碱占金钗石斛总生物碱含量的石斛属植92%以上。随着对石斛碱研究的物石深入，在越来越多的斛碱石斛属植物中检测到石斛碱的存在，其含量主要受到石斛种类、进展植株部位、药用研究栽培条件、石斛属植采收期及加工方式等多方面的物石影响。

2.1不同石斛种类对石斛碱的斛碱影响

王晓媛等比较了石斛属6种石斛主要化学成分差异，包括线叶石斛(D.aurantiacum Rchb.f.)、进展蜻蜓石斛(D.pulchellum)、药用研究杓唇石斛［D.moschatum(Buch.-Ham.)Sw.］、石斛属植叠鞘石斛(D.denneanum Kerr.)、物石流苏石斛(D.fimbriatum Hook.)以及细叶石斛(D.han-cockii Rolfe)，斛碱采集部位为1年生茎段，进展结果发现，仅在线叶石斛中检测到石斛碱存在，质量分数为0.02%，低于《中国药典》规定。陈志辉等运用TLC对叠鞘石斛、流苏石斛、金钗石斛的化学成分进行比较鉴定，结果发现，仅在金钗石斛中检测出石斛碱色谱斑点，而流苏石斛和叠鞘石斛中未发现石斛碱色谱斑点；李振坚等研究表明，目前仅石斛属4个种中发现含有石斛碱，包括金钗石斛、矩唇石斛(D.linawianum Rchb.f.)、棒节石斛(D.findleyanum Par.et Rchb.f.)以及线叶石斛，铁皮石斛(D.officinale Kimura et Migo)作为石斛市场的主流产品，虽然对其研究比较多，但是并未检测到石斛碱的存在。陈晓梅等研究也表明，在铁皮石斛中未能检测出石斛碱，而石斛碱在金钗石斛中具有较高的含量；此外，HPLC-MS分析结果显示，铁皮石斛中总碱含量低、生物碱类化合物数量少。但近几年，有相关研究报道称在铁皮石斛中检测分离到石斛碱，如李海涛等从云南产铁皮石斛组培苗中提取到石斛碱，提取率分别为根(0.06%)、茎(0.34%)、叶(0.00%)；徐德林等对采集到的9个来自云南和浙江不同石斛样品中石斛碱含量进行测定，结果发现，不同石斛种之间的石斛碱含量具有较大的差异。其中，金钗石斛干燥茎中石斛碱含量均高于6.0 mg/g，而铁皮石斛中石斛碱含量仅为金钗石斛的12%～46%；杨洋等、葛颖华等也在铁皮石斛中检测到石斛碱的存在。在其他研究相对较少的石斛品种中，也发现了石斛碱的存在。如姚春等对灯笼石斛组的7个石斛品种进行化学成分测定，发现在密花石斛(D.densiflorum Lindl.)(0.07%)和聚石斛(D.lindleyi Stendel)(0.02%)中检测到石斛碱的存在，且含量较低。

随着人工组培技术的发展，对于石斛品种的道地性产生了一定的冲击和影响，加之石斛种类繁多、种质混杂，故造成以上现象的产生。笔者建议，未来可加大对于石斛品种鉴定的研究力度，如生物学特性分析、特征指纹图谱构建以及DNA条形码鉴定等；同时，在结合对石斛道地性的考虑分析基础上，规范石斛组培技术的标准化，保障石斛组培苗质量。

2.2不同植株部位对石斛碱的影响

茎作为石斛的入药部位，富含丰富的石斛碱，而研究表明，在金钗石斛的叶片、花和根中也检测到石斛碱的存在。王宪楷等对栽培在10种木本植物上以及生长于石缝间的金钗石斛中石斛碱的含量进行研究，发现石斛碱含量茎＞叶的石斛栽培附生植物为乌柏、油桐、柿、枫杨、李和四川虎皮楠，茎＜叶的有枣、杏、香椿和梨，而石缝间野生的金钗石斛中石斛碱含量最高，分别为茎中含石斛碱(3.18%)、叶(0.83%)、根(0.08%)；胡志刚等研究发现，贵州赤水金钗石斛中石斛碱的含量分布规律为茎(0.63%)＞花(0.45%)；李华云等研究发现，四川泸州和贵州赤水产的金钗石斛，只有茎中的石斛碱含量符合《中国药典》规定，而叶和根中的石斛碱含量远远低于《中国药典》标准。总体来说，石斛茎中石斛碱含量较石斛其他部位的含量高，再一次佐证了传统医药学以及《中国药典》中以石斛茎入药的依据。

2.3不同栽培条件对石斛碱的影响

目前对于石斛属植物的主要栽培方式可分为野生栽培、仿野生栽培以及人工温室种植三大类型。徐晓林等对采集自17个不同地区的野生金钗石斛中石斛碱的含量进行分析，结果发现，广西百色产金钗石斛中石斛碱含量高于其他地区，云南、贵州以及缅甸地区产金钗石斛中石斛碱含量差异较小，而西藏、四川以及海南地区金钗石斛中石斛碱含量未能达到药典规定的0.40%；李文涛等利用偏最小二乘回归法(PLS)对16份采集自不同省份的金钗石斛中化学成分及其与生态因子的相关性进行研究，结果表明，石斛碱含量为贵州(0.28 mg/g)＞广西(0.25 mg/g)＞云南(0.24 mg/g)＞四川(0.23mg/g)。年降水量与石斛碱含量呈最大正相关性，其次为日照时长；土壤类型与石斛碱含量呈最大负相关，其次为湿度。VIP直方图表明，土壤类型(1.730)、年降水量(1.592)和年均温(1.041)的权重系数＞1，为影响石斛碱含量积累的主导因子；李在军等研究发现，林下仿野生环境栽培的金钗石斛中石斛碱含量(0.18%)高于温室内栽培的石斛(0.15%)；王宪楷等研究发现，石缝间野生的金钗石斛中石斛碱含量较高，优于树上栽培的石斛；任红等研究发现，金钗石斛中石斛碱的含量分布为仿野生贴石栽培(0.82%)＞仿野生贴树(0.60%)＞大棚离地床栽(0.53%)，这一结果与王宪楷研究结果相一致；牛晓娟等研究发现，培养温度、培养天数、初始pH以及摇床转速均能对金钗石斛悬浮培养细胞中的石斛碱含量产生一定的影响。

Jin-ling Li等对培养在温室中不同培养条件下的金钗石斛中石斛碱含量进行研究，结果发现，石斛茎中石斛碱含量在光照强度为75.02%时达到最高，而石斛叶片中石斛碱的含量在光照强度为39.74%时达到最高；魏明等研究发现，硝酸镧浓度为5.0 mg/L时，可提高金钗石斛中多糖和石斛碱的含量；倪竹君等研究发现，石斛组培苗经5-氮杂胞苷(5-azaC)处理后，其石斛碱含量在每克干重材料中的占比在处理60 d和90 d后，分别达到0.17 mg/g和0.18 mg/g，为对照组的1.5、1.6倍；薛敏等［42］研究发现，利用不同种类的叶面肥对金钗石斛幼苗进行喷施处理之后，石斛茎中石斛碱含量依次为沼液肥(0.23%)＞叶面肥1(0.17%)＞叶面肥2(0.14%)＞多元素复合肥(0.13%)，与对照组(清水处理，0.09%)相比，分别增加石斛碱含量:155.56%、88.89%、55.56%、44.44%。由此可见，药用石斛属植物的产地、生态环境因子(土壤类型、年降水量、年均温、日照时长、湿度等)、附生基质(岩壁、数载、棚栽等)以及人工栽培时的培养条件(光照强度、肥料、培养温度、稀土元素、DNA化学修饰等)均能对其药效成分产生一定的影响。

2.4不同采收期对石斛碱的影响

《中国药典》中注明，金钗石斛、鼓槌石斛(D.chrysotoxum)、流苏石斛及其近似种的新鲜或干燥茎全年均可采收，而建议铁皮石斛的干燥茎在11月至翌年3月进行采收，不同采收期会对石斛属植物中活性成分的含量产生一定的影响。蔡伟等比较测定同一产地金钗石斛茎中石斛碱含量，结果发现，1年生(0.55%)＞2年生(0.40%)＞4年生(0.36%)＞3年生(0.35%)；刘杨等研究发现，1年生金钗石斛茎中石斛碱含量最高(0.90%)，第2年进入生长期之后，其含量开始逐渐下降，最低为0.40%；颜寿等研究发现，四川省合江县产的不同生长年限金钗石斛中石斛碱的含量依次为1年生(0.48%)＞2年生(0.44%)＞3年生(0.22%)。从石斛的采收月份来看，蔡莉等研究发现，贵州省赤水市旺隆镇鸭岭村和红花村产的2年生金钗石斛茎中石斛碱含量在12月均达到最高值，分别为0.70%和0.64%，在8月(0.40%)和9月(0.41%)达到最低值；李金玲研究发现，1年生金钗石斛茎中石斛碱含量变化波动较大，出现了2次升高:第一次是在3—6月，石斛碱含量发生迅速的升高；第二次是在10—12月，石斛碱含量缓慢地升高；2年生金钗石斛茎中石斛碱含量在11月已超过《中国药典》规定的0.40%、12月含量为0.49%、翌年1月含量超过0.50%，而2月含量却低于0.40%。

总体来说，相比于其他年份采收的石斛属植物而言，1年生该属植物中石斛碱含量最高，具有较高的药用价值。但是，由于人工栽培的石斛属植物生产周期较长，石斛碱含量随生长时间的动态变化规律还有待进一步的深入研究。故而，在确定石斛属植物的合理采收期时，不应该仅仅以多糖、生物碱或石斛碱等某个单一指标来确定，应结合石斛生长特性以及干物质的积累量、药效成分含量等多项指标进行综合考虑。

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