甘蓝型油菜乙酰转移酶基因的克隆及功能验证（二）

2.2.2 蛋白质二级结构预测与分析

通过在线PredictProtein软件对AT基因不同拷贝编码的甘蓝功蛋白质进行亚细胞定位发现2个蛋白均定位在细胞质；TMHMM跨膜螺旋区分析表明,2个蛋白均为膜外蛋白，无跨膜结构。型油酰转SOPMA结构预测表明,菜乙AT蛋白中，无规则卷曲占比最高,移酶验证均在43%左右,其次为x-螺旋,约占35%，延伸链约占18%,基因β-转角约占4%，两蛋白有一定差异(表4)。隆及

2.2.3 蛋白质三级结构预测与分析

经SWISS-MODEL同源建模发现,甘蓝功114、148均适应酰基转移酶模型,型油酰转但其构象略不同(图1,2）。

2.3 过表达与RNAi干扰重组质粒图谱

AT基因的菜乙2个拷贝114与148过表达重组质粒见图3-A。AT基因的移酶验证2个拷贝114与148RNAi重组质粒见图3-B。

2.4 转基因拟南芥检测

经潮霉素筛选T0转基因拟南芥种子后(图4),基因对T1进行pCambia1300-35s-114、pCambia1300-RNAi-114、隆及pCambia1300-35s-148及pCambia1300-RNAi-148载体潮霉素鉴定,甘蓝功结果表明(图5),目的质粒T-DNA均已插入拟南芥基因组,表明拟南芥转基因成功。

由表5可知,型油酰转与野生型拟南芥种子脂肪酸各成分相比,干扰114基因(114R)表达会导致硬脂酸和油酸含量极显著的增加,增加幅度分别为10.25%,38.33%,而软脂酸和亚麻酸是极显著的减少,减少幅度分别为10.57%,17.90%,显著减少亚油酸的含量,花生烯酸的含量也有减少,但是差异不显著；过表达114基因(35s-114)会导致软脂酸、油酸和亚油酸含量的菜乙显著增加,增加幅度分别达到15.52%,37.88%,12.33%,而硬脂酸、亚麻酸和花生烯酸含万方数据量达到极显著的减少,幅度分别为50.22%,10.86%,29.93%。

在对饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸分析中,干扰114基因会使饱和脂肪酸含量下降,对不饱和脂肪酸无显著影响；过表达114基因会增加不饱和脂肪酸的含量,而对饱和脂肪酸无显著影响。

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