浑浊红球菌PD630对黄曲霉毒素B1的生物降解特性研究（四）

浑浊红球菌PD630在培养基中降解AFB1的浑浊红球黄曲效果与培养基中AFB1浓度密切相关。如图5所示，菌P解特究当培养基中的对的生AFB1浓度为0.25、0.5μg/mL时，霉毒AFB1含量在24h内急剧减少，物降含量分别为18.14%、性研26.12%，浑浊红球黄曲36h～72h降解效果逐渐趋于稳定，菌P解特究72h后含量分别稳定在3.90%和6.45%。对的生当培养基浓度为1、霉毒2μg/mL时，物降在24h内AFBI的性研降解趋势较为平缓，培养72h后AFB1含量为19.52%及33.59%。浑浊红球黄曲可以得出，菌P解特究当培养基中的对的生AFB1浓度较低时，降解是一个快速的过程，而当培养基中的AFBI浓度较高时，则降解过程相对变得缓慢。张铭的研究结果显示出相似的趋势，当培养基中AFB1浓度较低时（50、100、200、500ng/mL），短黄杆菌3J2M0降解速率较快，而当AFB1浓度增加到1000ng/mL时则降解速率显著降低。
 

6、无细胞.上清、菌细胞悬液、胞内裂解物对黄曲霉毒素B1的降解活性

目前，对微生物脱除毒素的机制研究有两点：一种是细菌菌体细胞壁的吸附作用，主要是通过细胞壁上β-葡聚糖、肽聚糖等多糖或功能蛋白的疏水相互作用进行吸附，常见的菌种如乳酸菌、酵母菌等。二是通过菌体培养过程所产生的胞内或胞外活性物质，破坏毒素结构从而起到降解作用，常见的菌种例如芽孢杆菌、假单胞菌等。如图6所示，PD630无细胞上清对AFB1的降解活性显著高于菌细胞悬液、胞内裂解物。上清液培育72h后AFB1的残留率仅为18.33%，而菌细胞悬液和胞内提取物处理72h后AFB1残留率为48.79%及90.18%。结果表明PD630菌株对AFB1的脱除机制是降解作用而非吸附作用，且参与AFB1降解作用的活性成分主要存在于上清液中。据文献报道，YanliXie等研究发现，Pantoeasp.T6的无细胞上清液对AFB1的降解活性（68.30%）显着高于活细菌细胞（4.87%）和细胞内细胞提取物（3.68%）。K.RakshaRao等从鹿粪便中分离的地衣芽孢杆菌CFR1无细胞上清在72h温育后上清液降解活性达到93.67%，表明降解作用主要发生于地衣芽孢杆菌CFR1的无细胞上清中。

7、PD630菌株无细胞上清液对黄曲霉毒素B1的降解效果

如图7所示，PD630培养上清液对AFB1的降解是一个快速的降解过程。在培育36h后AFB1的含量降低到28.72%并趋于稳定，在培育72h后AFB1的含量仅为17.49%。与图2相比，培养上清液处理AFB1的速率加快，PD630菌株培养48h后，培养基中AFB1的含量显著性降低，AFBI残留率仅为10.58%。当培养时间达72h后，AFB1残留率稳定在6.96%。实验证明，浑浊红球菌PD630菌株可以有效用于AFB1污染底物的生物修复。已有文献报道关于AFB1的生物修复作用，XiaoshuangXia等人从土壤中筛选出一株枯草芽孢杆菌JSW-1，在AFB1终浓度为2.5μg/mL的NB培养基中培养72h后AFB1降解率为67.2%。SilivanoE.Mwakinyali等人研究发现短黄杆菌3J2M0在AFB1污染浓度为0.1μg/mL的LB培养基中温育48h后，降解率可以达到93.82%。菌株与AFB1共培养实验显示培养48h后降解趋于稳定，而上清液处理36h后降解效果则开始趋于稳定。

8、加热、EDTA蛋白酶K对无细胞上清降解黄[曲霉毒素B1活性的影响

如图8所示，当无细胞上清中加入蛋白酶K和EDTA处理后时，上清降解AFB1的能力显著降低。与不作任何处理的空白无细胞上清组相比，蛋白酶K处理后AFB1降解效果明显降低，表明无细胞上清中存在蛋白质或者酶活性成，分参与了AFB1的降解。而加人作为金属螯合剂的EDTA后，温育结束后AFB1的含量甚至高达79.58%，这说明无细胞上清中的活性成分需要一些金属阳离子辅助降解AFB1。最值得注意的是，当加热处理（煮沸处理20min及1210C高温高压处理10min）无细胞上清时，上清降解AFB1的活性仍然存在，可以推测上清中参与AFB1降解的蛋白质或者酶活性成分具有优秀的热稳定性。这种现象在文献中有所报道，CuiqiongWang等发现镰刀菌WCQ3361的无细胞上清液具有高热稳定性，煮沸10min后仍然保持99.40%的AFB1高降解活性。LancineSangare等发现铜绿假单胞菌N-17的无细胞上清用蛋白酶K处理后，降解率显著下降；而上清液经过热处理后（沸水浴10min），刺激提升了AFB1的降解活性，表明N17-1菌株降解AFB1有关的蛋白质或酶是热稳定的。XianShu等发现，贝莱斯芽孢杆菌DY3108（BacillusvelezensisDY3108）的培养上清液经过热处理后，降解能力被刺激提升，从而推测为酶的热活化（Thermalactivationofenzymes）现象。依据XianShu等的说法，由于大多数酶不能忍受工业生产苛刻的环境条件，因此热稳定酶因其耐热性可以作为优秀的酶催化剂替代品，承受工业过程中的苛刻反应条件，对最终应用十分有益。PD630菌株降解AFB1的酶活性成分的热稳定性使其潜在应用价值大大提高。

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