干贝多糖的蛋白质脱除方式对抗氧化活性的影响（三）

2.5 扫描电镜分析

如图2所示，干贝碱酶组多糖放大200倍时，多糖的蛋对抗的影呈不规则块状，白质且有碎屑状粗多糖散落，脱除疏松多孔；放大粗糙面至1000倍时，氧化表面凹凸不平，活性散布致密圆形孔径；10000倍下，干贝多糖表面略粗糙，多糖的蛋对抗的影有裂纹。白质稀碱组多糖放大至200倍时，脱除呈大小不一的氧化不规则片状，表面光滑；1000倍下，活性多糖切面平整；10000倍时，干贝多糖表面稍有网形凸起和凹陷，多糖的蛋对抗的影棱角清晰。白质TCA组多糖放大至200倍，呈大小、形状不一的块状；1000倍条件下，多糖碎片上有条形沟纹和孔洞；放大至10000倍时，观察到孔洞深浅不一，比较光滑，并呈直线排列于沟纹凹陷中。GDL组多糖存200倍条件下，呈不规则片状；放大粗糙面至1000倍下，多糖表面有裂纹，不平整，有大小不一的圆孔；10000倍条件下，观察到圆孔内粗糙不平整，有疏散的细孔。由图2可知，稀碱组多糖较光滑致密，分子排列较整齐，说明稀碱组多糖分子间相互作用较强，其余3组多糖较疏松，多孔。所有多糖分子间隙均较大，可能是干贝柱多糖分子问的斥力导致分子之间有一定的距离。

2.6 体外抗氧化能力分析

如图3所示，未脱蛋白的DAMP与4种蛋白质脱除方式得到的十贝多糖均有一定清除DPPH自由基的能力，但除了GDL组多糖，其他组多糖的DPPH自由基清除能力都不及VC。经GDL法纯化的多糖显示出明显的DPPH自由基清除能力，并呈剂量依赖关系。当多糖质量浓度为10mg/mL时，GDL组多糖的DPPH自由基清除率为80.56％。不同蛋白脱除方式对干贝多糖清除羟基自由基能力的影响见图4，稀碱组多糖显示出明显的羟基自由基清除能力，并呈剂量依赖关系。当多糖质量浓度为10mg/mL时，稀碱组多糖的羟基自由基清除率为93.64％，比较接近VC的清除能力(10mg/mL，99.73％)。碱酶组及GDL组多糖的羟基自由基清除能力优于TCA组多糖，可见，干贝多糖的抗氧化活性与多糖含量并不相关，而是与单糖组成、空间构象等诸多因素有关。

DAMP的抗氧化活性不高，可能是贝柱干燥过程中，水分的蒸发使水分子与贝柱多糖中的分子间氢键断裂。引起多糖空问结构的破坏，进而影响抗氧化活性。TCA组多糖对DPPH自由基及羟基自由基的清除能力均不理想，可能存TCA法脱蛋白质过程中，糖苷键在酸性条件下断裂，造成多糖含量检测偏高但活性较低。丰富的氨基酸与生理活性有紧密的联系，总氨基酸含量与抗氧化活性呈正相关，TCA组多糖总氨基酸含量不高，这与体外抗氧化试验结果一致。稀碱组多糖表现出良好的羟基自由基清除能力，但DPPH自由基清除能力最弱，可见不同抗氧化活性与干贝多糖结构关系的联系不尽相同。可能由于稀碱组多糖中的基团容易提供质子氢与羟基自由基反应。稀碱组多糖含有较多的Asp和Glu，Asp和Glu具有抗氧化能力，因此推测稀碱组多糖较强的羟基自南基清除能力可能也与其含有的氨基酸有关。GDL组多糖中，疏水性氨基酸、极性氨基酸与非极性氨基酸含量较高，葛晓鸣等研究发现，疏水性氨基酸在DPPH自由基的清除中起到决定性的作用，而极性氨基酸和非极性氨基酸可通过协同作用促进DPPH自由基的清除，因此GDL组多糖表现出良好的自南基清除活性。聚糖链的构象与其生物活性密切相关，GDL组及碱酶组多糖的抗氧化活性较好，也可能是其含有的三螺旋结构对多糖活性产生影响。有研究表明，分子间氢键作用是三螺旋结构刚性的主要动力。据报道，刚性三螺旋结构具有抗肿瘤活性及免疫活性，三螺旋葡聚糖与其他生物活性问的关系还待进一步研究。

3 结语

不同蛋白质脱除方式的多糖组分、结构和抗氧化活性不同。TCA法脱蛋白效果最显著，脱蛋白质后多糖质量分数提高至(74.83±0.27)％，蛋白质脱除率为(86.36+1.01)％，但多糖抗氧化活性和总氨基酸含量最低，单糖组成简单，不具有三螺旋结构，适用于以于贝多糖结构研究为目的的纯化。GDL法脱蛋白质的效果次于其他3种方式，脱蛋白质后多糖质量分数提高至(62.51±0.71)％，蛋白质脱除率为(27.42±0.67)％，但综合来看多糖抗氧化活性高于其他组多糖，总氨基酸质量分数最高，单糖组成丰富，具有三螺旋结构，该方法比较适合于获取具有较好抗氧化活性的干贝多糖研究。碱酶法脱蛋白效果与稀碱法无显著差别，但其总氨基酸含量高于稀碱组，单糖组成较稀碱组丰富，且具有三螺旋结构，多糖活性高于稀碱组多糖，稍次于GDL组多糖。作者希望获得高含量高活性的多糖组分，故选择碱酶法脱蛋白质。

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