荧光光谱法和磷光光谱法（七）

4、荧光实验内容与步骤

(1)于25mL容量瓶中分别配制3.5×10^-4mol／L Py和1.0×10^-2mol／LDCNB的光谱光谱乙腈溶液。

(2)移取1mL Py溶液分别加入6个10mL空容量瓶中，法和法其中一个用乙腈稀释至刻度，磷光其荧光强度为I₀，荧光其余5个分别加入0.25，光谱光谱0.40，法和法O.60，磷光0.80，荧光1.0mLDCNB溶液，光谱光谱用乙腈稀释至刻度，法和法其荧光强度分别为I₁，磷光I₂，荧光I₃，光谱光谱I₄，法和法I₅。需要注意的是，Py的浓度不必太准确，但DCNB的浓度一定要准确。选择上述DCNB浓度的根据是I₀／I值要控制在4以下。

(3)分别取上述溶液4mL移入6个荧光池中，将荧光池放人冰水浴中一边冷却一边用玻璃毛细管插入溶液中，通Ar气15min以上除去溶液中的溶解氧，立即将荧光池盖子盖好。

(4)先在荧光分光光度计上测定I₀溶液，选取激发波长在340nm附近并获得最大荧光发射强度的位置，然后在350～500nm测定荧光光谱。在同样仪器条件下，分别测定溶液的荧光光谱。取Py荧光强度最大波长处的荧光强度值，以I₀／I对[DCNB]作图，由曲线斜率求得是K_Q值。

5、注意事项

使用荧光池应注意避免机械碰撞、磨损、划痕，用毛细管通Ar气除氧时注意不要划伤荧光池内壁。配制DCNB溶液时要保证其浓度准确。

6、数据处理

实验测定正确，则可以得到符合式(15.13)的直线(见图15.14)，其斜率约为2800L／mol(=k_qτ)。由Py的τ= 300ns，可以求得Py与DCNB的光诱导电子转移反应的速率常数k_q=1×10¹⁰L／(mol·s)。

十一、3-羧基香豆素的固体基质室温磷光测定

1、实验目的

(1)了解固体基质室温磷光法的基本原理和优缺点。

(2)学习固体基质室温磷光法的基本操作。

2、实验原理

以1mol／L Pb(Ac)₂作外重原子微扰剂，3-羧基香豆素在滤纸基质上，经适当干燥后能发射很强的室温磷光(RTP)信号。

3、仪器与试剂

仪器：日立M850型荧光分光光度计，磷光方式。

(1)磷光附件(由实验室人员负责安装)参数设置

磷光(phosphorescence)

模式(Mode)：光谱(Spectra)

斩光器速度(Chopping Speed)：高(High)

光闸(Shutter)：开(Open)

门宽(Gate Width)：5

前置放大(Pre-AMP)

参考资料：现代仪器分析实验与技术