脱糖大豆粉末磷脂中磷脂酸的分离(一)
磷脂酸(简称为PA)是脱糖一种二酰基甘油磷脂,也是大豆的分细胞膜的组成成分之一,PA分子内含有甘油骨架,粉末其中sn-1和srt-2羟基被脂肪酸酯化,磷脂离St/-3位被磷酸基团取代。中磷脂酸研究发现PA具有促进细胞有丝分裂、脱糖引起肌肉收缩、大豆的分促进激素分泌等生物学功能,粉末在食品、磷脂离药品和化妆品等多个领域具有重要的中磷脂酸应有价值。大豆磷脂富含PA成分,脱糖含量约为5%~15%,大豆的分是粉末制备PA的主要商业来源。目前PA的磷脂离制备方法主要有三种,即溶剂法、中磷脂酸酶法与化学合成法。陶银华等使用乙醇与甲醇依次萃取大豆粉末磷脂,之后使用体积比为1:4的正己烷-甲醇进行液液萃取,经锌离子处理得到含量为98%的PA产品,回收率较低,为10%。TsutomuNishide等通过磷脂酶D水解磷脂酰胆碱制备PA,可得含量80%以上PA产品,但磷脂酶D较为昂贵。陈福明等使用化学合成的方法,以双硬脂酸甘油脂为原料,与五氧化二磷反应后得到粗磷脂酸,溶于低碳醇、酮、石油醚等溶剂后重结晶纯化,干燥后可得含磷量在3.5%以上的磷脂酸产品,该法反应条件要求较高,工艺复杂。 本文用酸性乙醇提取脱糖磷脂中的PA,提取液经冷冻沉淀后,通过调节pH得到PA产品。该方法具有工艺简单的特点,易于规模化制备PA。 一、材料与方法 1、原料与试剂 大豆粉末磷脂(SPO),江苏省曼氏生物科技有限公司;脱糖大豆粉末磷脂,实验室自制;正己烷、无水乙醇、氨水、盐酸,分析纯,国药集团化学试剂有限公司;正己烷、异丙醇,色谱纯,国药集团化学试剂有限公司;PA标准品,美国sigma公司。 2、仪器与设备 EL204-IC电子分析天平:MettlerToledo仪器有限公司;RE-52A型真空旋转蒸发仪:上海亚荣生化仪器厂;SHZ-D(III)水循环式真空泵:巩义市予华仪器有限公司;Waters1525高效液相色谱仪(蒸发光检测器):美国沃特世公司;HH-4恒温水浴锅:常州市金坛区环宇科学仪器厂;DKZ系列电热控温振荡水浴锅:常州金坛精达设备有限公司;KH5200DE型超声清洗器:上海冠特超声仪器有限公司;ZK-072型真空烘箱:上海市实验仪器总厂。 3、实验方法 (1)PA提取实验 准确称取脱糖磷脂10.00g于500mL锥形瓶中,按一定料液比加入一定酸醇比的酸性乙醇(V25%HCI:V无水乙醇来表示酸醇比),升温到一定温度搅拌一定时间后,过滤。将酸提液在-20℃下冷冻4h时间,滤去沉淀后,使用氨水调清液pH至沉淀析出,取沉淀溶于一定量正己烷中,充分搅拌后滤去不溶物,滤液经旋转蒸发脱溶后得PA产品。 (2)HPLC分析 样品配置:用流动相溶解得到浓度为3mg/mL的样品溶液,经0.221μm膜过滤,采用外标法进行HPLC检测。 HPLC条件:色谱柱:Si-60(250mm×4.6mm,5μm);柱温:30℃。检测器:蒸发光检测器,漂移管温度:55℃。进样量:10μL。流动相为正己烷:异丙醇:1%乙酸(8:8:1,v/V/V),流速:1.0mL/min。 PA标准溶液的配置:准确称取10.0mg质量的PA于5mL容量瓶中,使用流动相溶解并定容。取上述溶液分别稀释为0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0mg/mL的标准溶液。 (3)回收率的计算 PA回收率的计算见下式: 二、结果与分析 1、PA含量的测定 标准样品、原料和产品的HPLC图见图1、图2和图3,由图1可见PA的保留时间为7.6min,图2、图3中保留时间为7.6min的峰为PA。 以PA含量为横坐标,积分面积为纵坐标绘制标准曲线,浓度范围为0.2~2.0mg/mL,回归方程为Y=6704241.57x-181158.33,R2=0.998,结果表明,PA在浓度范围为0.2~2.0mg/mL之间呈良好的线性关系,标准曲线见图4。 分析原料中的PA含量为9.3%。 声明:本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系 相关链接:异丙醇,磷脂,氨水,磷脂酶D
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