海洋细菌MicrobacteriumesteraromaticumMCDA02产几丁质脱乙酰酶发酵条件优化（二）

2、海洋菌株MCDA02的细菌酰酶鉴定菌株MCDA02为革兰氏阴性短杆菌(图2b)，无芽孢。丁质该菌株在LB固体培养上培养48h后：黄色，脱乙条件不透明，发酵表面光滑湿润，优化圆形，海洋边缘齐整，细菌酰酶中心稍突起，丁质易挑取(图2a)。脱乙条件该菌株明胶酶、发酵吲哚试验、优化硫化氢产生、海洋VP试验、细菌酰酶硝酸盐还原试验、丁质尿素酶、柠檬酸盐均呈阴性，氧化酶、接触酶试验均为阳性(表1)。菌株MCDA0216SrDNA序列提交GenBank(登录号：MH454348)，BLAST比对后发现菌株MCDA02与Microbacteriumesteraromaticum的同源性最高。利用MEGA9.0软件通过邻接法构建系统发育树(图3)，菌株MCDA02与Microbacteriumesteraromaticum亲缘关系最近，将菌株MCDA02鉴定为Microbacteriumesteraromaticum。目前尚未见酯香微杆菌产几丁质脱乙酰酶的报道。

3、发酵培养基成分对菌株MCDA02发酵产CDA的影响

（1）发酵培养基碳源对菌株MCDA02产酶的影响

碳源对菌株MCDA02发酵产酶的影响如图4，所选的8种不同的碳源中，木薯淀粉为碳源时该菌株产酶最高，其次为乳糖，其相对酶活也达到了70％以上，玉米淀粉相对酶活最低仅有10％。因此最终选用木薯淀粉作为发酵培养基的碳源。

（2）发酵培养基氮源对菌株MCDA02发酵产CDA的影响

氮源对菌株MCDA02生长的影响如图5，所选的11种不同的氮源中，添加蛋白胨时该菌株产酶最高，其次为玉米浆，其相对酶活也达到75％以上，而其余氮源相对酶活均为达到70％。因此最终选用蛋白胨作为发酵培养基的氮源。

（3）发酵培养基无机盐对菌株MCDA02发酵产CDA的影响

无机盐对菌株MCDA02生长的影响如图6，所选的9种不同的无机盐中，添加ZnSO4时该菌株产酶最高，紧接着是KH2PO4，其相对酶活达75％以上，添加CuSO4时相对酶活最低，不足25％。因此最终选用ZnSO4为配制发酵培养基所用无机盐。

4、发酵条件对菌株MCDA02发酵产CDA的影响

（1）发酵时间对菌株MCDA02发酵产CDA的影响

发酵时间对菌株MCDA02生长的影响如图7，发酵时间在36h～48h时，产酶量显著增加。发酵时间处于48h～72h之间时，产酶量增长速度减缓。发酵时间达到72h时产酶量达到最高点，发酵72h后菌株MCDA02产酶量开始下降。

（2）发酵温度对菌株MCDA02发酵产CDA的影响

发酵温度对菌株MCDA02生长的影响如图8，在30℃时菌株MCDA02产几丁质脱乙酰酶的量最高。温度超过30℃时，菌株的产酶量迅速下降，温度到达40℃时，菌株MCDA02的相对酶活低至10％左右。

（3）发酵培养基起始pH对菌株MCDA02发酵产CDA的影响

发酵培养基起始pH对菌株MCDA02生长的影响如图9，随着发酵培养基初始pH的升高，菌株产酶能力随之提升，pH为8.0时，产酶量达到最高。pH继续升高，菌株MCDA02产酶量降低，pH为10.0时，菌株MCDA02相对酶活低至20％以下。
 

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