响应面法优化牛舌草多糖提取工艺及其对DNA氧化损伤的保护作用（三）

应用Design—Expert8.0.6软件对表3中数据进行二次多元回归拟合，面法得到二次多项回归方程

Y=5.21+0.34A+O.25B+0.31C-0.19D+0.38AC+0.17BC-0.22CD-0.19A₂-0.36B₂-0.27C₂-0.49D₂。优化艺及A氧

由表4方差分析结果可知，牛舌回归模型的草多回归效果显著(P＜0.05)，线性系数较好(R²=0.9986)，糖提说明建立的取工其对数学模型可以较好地描述实验结果，能够分析和预测响应值。化损表4中P值大小可以表明各因素对响应值的保护影响，结果表明：料液比(A)、作用提取时间(B)、面法超声功率(C)和提取次数(D)四个因素对相应值的优化艺及A氧影响大小顺序为即A＞C＞D＞B。

图5是牛舌对牛舌革多糖提取的交互作用最显著的两个因素，料液比和提取次数的草多的响应面，其曲面较陡，糖提而其他因素交互作用不显著，取工其对表现为曲面较为平滑，DesignExpert8.0.6软件为响应面分析提供了最佳条件优化模块，由软件分析并考虑实际情况，将各因素条件取整，得到最佳提取工艺为：料液比为1∶40，提取时间为40min，超声功率为200W，提取次数为3次时牛舌草多糖理论含量为l29.06mg/g。

3、验证试验

精密称取牛舌草药材粉末5g共3份置锥形瓶中，按筛选的最佳提取工艺提取，测定多糖含量，测得牛舌草多糖含量为128.36mg/g，与理论预测值误差很小，说明该方程与实际情况拟合较好，所建模型正确，利用响应面分析法得到的牛舌草多糖提取条件真实可靠，具有实用价值。

4、牛舌草多糖体外抗DNA氧化损伤结果

用·OH诱导损伤DNA，会生成丙二醛(MDA)类似物，该物质在酸性条件和TBA反应后产生的粉红色物质，在532nm处有最大吸收，因此，基于TBA法测定MDA类似物相对含量，能够对DNA的损伤程度进行间接评估。如图6所示，在0.2～2.0mg/mL浓度范围内，牛舌草多糖能够抑制生成MDA类似物的形成，其效应具有浓度依赖性，在浓度达到1.6mg/mL时其抑制效应最高，对DNA的保护率达到57.38％，IC₅₀值为1.4mg/mL，提示牛舌草多糖对DNA氧化损伤具有一定的保护作用。

三、结论

植物多糖的提取方法主要包括加热回流法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法等方法，不同提取方法采用的条件对植物多糖的提取率有较大的影响，所以需要对提取工艺参数进行优化，以提高植物多糖的提取率。响应面法是基于合理的实验设计方法并通过对得到的数据进行多元二次回归方程分析来拟合因素与响应值之间的函数关系，寻求最佳工艺参数，响应面法可以更好地反映多个因素多水平之间的变化关系，已被广泛地用于天然成分提取工艺的优化。本实验结合单因素试验和响应面分析法对超声辅助提取牛舌草多糖的工艺条件进行了优化，获得了最佳提取工艺条件，其最佳工艺为料液比为1∶40，提取时间为40min，超声功率为200W，提取次数为3次，在此工艺条件下牛舌草多糖的得率为128.36mg/g，然而，在实际生产过程中要考虑溶剂消耗和回收耗能等问题，可以适当的调整工艺。

DNA氧化损伤发生突变是导致衰老、癌症等疾病发生的一个重要原因，活性氧对生物机体有毒害作用，毒性最大的是·OH，可以引起蛋白质变性，DNA断裂，而DNA作为人体重要的遗传物质，受损会引起染色体突变，畸形等。细胞内过多的活性氧，如·OH、超氧阴离子等均是造成DNA氧化损伤的主要来源，因此，寻找天然的抗DNA氧化损伤化合物或者天然产物是一个研究方向，可以预防上述疾病的发生。本实验通过紫外分光光度法测定了牛舌草多糖对·OH诱导的DNA氧化损伤的保护作用，结果表明牛舌草多糖具有显著的抑制DNA氧化损伤作用，当浓度达到1.6mg/mL时，具有最佳保护作用，为牛舌草开发利用提供了一定的科学依据。

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