共振光散射法测定焙烤食品及饮料中的添加剂———甜蜜素（一）

建立简便、共振光散快速测定面包、射法食品素饼干、测定果味饮料及碳酸饮料中甜蜜素的焙烤高灵敏共振光散射新方法。在pH9.27Tris-HCl介质中，及饮加剂甜蜜素与维多利亚蓝B以静电作用生成离子缔合物，料中使共振光散射(resonancelightscat-tering，甜蜜ＲLS)显著增强，共振光散并在369nm处产生一个特征散射峰的射法食品素新共振光散射光谱，甜蜜素的测定质量浓度在0.004～0.4mg/L范围内与共振光散射增强强度(ΔIＲLS)呈线性关系，检出限为0.0035mg/L，焙烤样品的及饮加剂定量限分别为2.69mg/100g(面包和饼干)和29.2mg/L(饮料)，样品的料中加标回收率和相对标准偏差(n=5)分别为97.5%～103%和1.8%～2.6%。该法简便、甜蜜快速，共振光散有很高的灵敏度，适用于实际样品分析。

食品添加剂分为化学合成物质和天然物质两大类，合成添加剂的毒性大于天然添加剂，尤其在添加剂本身质量不纯，混有有害物质或超量使用时很容易对人体造成危害，而食品业使用的绝大多数添加剂是化学合成物质，甜蜜素就是人工合成的一种甜味添加剂，它的甜度为蔗糖的30～50倍，现被广泛用于糕点、饮料及其他食品中。由于过度使用甜蜜素，会对人体造成一定危害，如引起人体病变，出现畸形、癌症、损坏肾功能等，因此，我国食品安全标准GB2760中对甜蜜素在食品中的使用范围和使用限量作了明确规定，如面包和糕点中甜蜜素不得大于1.6g/kg，饼干和饮料中甜蜜素不得大于0.65g/kg，尽管如此，食品业的超限量、超范围违规使用仍时有发生。目前，国内外对食品中甜蜜素的研究方法主要有：高效液相色谱法、气相色谱法、分光光度法、电化学法、液-质联用法及气-质联用等。

我国食品安全国家标准GB1886.37—2015对甜蜜素的检测方法为高氯酸滴定法，此法所用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，所用的溶剂冰乙酸就是一种酸性腐蚀性物质，有强烈的刺激性，对人体健康有一定危害；而滴定剂高氯酸不仅具有毒性、强的腐蚀性，还具有燃烧爆炸的危险性。而现在研究较多的高效液相色谱法、气相色谱法及液-质、气质联用等对样品的前处理工作较为繁琐、尤其是净化处理耗时较多。分光光度法虽操作简便，有较高的准确度和精密度，但灵敏度和选择性欠佳。

电化学法的条件要求较为苛刻。基于此，研究简便、快速、灵敏的甜蜜素检测方法很有必要。本实验采用高灵敏共振光散射技术，借维多利亚蓝B与甜蜜素反应生成离子缔合物，使显著增强的共振光散射信号与甜蜜素的质量浓度呈线性关系，建立了测定低脂、低蛋白类焙烤食品及饮料中甜味添加剂———甜蜜素的检测方法，该方法目前尚未见文献报道。

1材料与方法

1.1材料与试剂

甜蜜素(cyclamate)标准物质：GBW(E)100066，99.3%，中国食品药品检定研究院；维多利亚蓝B(victoriablueB)：99%，武汉易泰科技有限公司上海分公司；三羟甲基氨基甲烷(tris)：99.9%，上海吉至生化科技有限公司；盐酸：AＲ级，重庆川东(化工)集团有限公司；样品：面包(1#)、饼干(2#)、果味饮料(3#)、可乐型碳酸饮料(4#)，市售。甜蜜素标准溶液：贮备液为1.00×10－3mol/L水溶液，操作液由贮备液稀释配制成1.00×10－5mol/L水溶液，冰箱4℃保存。维多利亚蓝B溶液：贮备液为1.00×10－3mol/L水溶液，操作液由贮备液稀释配制成1.00×10－4mol/L水溶液；Tris-HCl溶液：由Tris溶液和HCl溶液混合，用pH计测定，配成pH3.0～9.8的系列溶液。

1.2仪器与设备

F-2500型荧光分光光度计，日本日立公司；EL104型电子天平，上海精密仪器仪表有限公司；TD5A-WS型离心机，湖南湘仪离心机仪器有限公司；KQ-200VDE超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司；pHS-3C型精密酸度计，上海虹益仪器仪表有限公司。

1.3样品处理

准确称取已粉碎、混匀的低脂、低蛋白面包及饼干样品各2～3g(精确至±0.0001g)，加适量水，搅拌、浸提10min，再超声20min、离心(4500r/min)5～10min，上清液用水定容至100mL，得到待测液1#和2#。准确移取3#和4#饮料各10.00mL，在温热水浴中超声20min，用水定容至500mL，得到待测液3#和4#。

1.4实验方法

于10mL具塞比色管中，准确加入2.50mL维多利亚蓝B操作液、1.50mLpH9.27Tris-HCl溶液及0.00～2.00mL甜蜜素标准操作液，用水稀释至刻度，摇匀。静置20min后，在荧光分光光度计上设λex=λem=220nm，狭缝5nm，扫描共振光散射光谱，在光谱曲线的特征峰369nm处测定体系溶液的共振光散射强度IＲLS及试剂空白的共振光散射强度I0，再由IＲLS-I0求得体系溶液的共振光散射增强强度ΔIＲLS。

2结果与讨论

2.1甜蜜素与维多利亚蓝B的ＲLS光谱特征

从图1可知，单独的甜蜜素标准操作液的ＲLS信号非常微弱，如曲线1所示。

单独的维多利亚蓝B操作液的ＲLS信号较弱，在400nm处有一最大散射峰，如曲线2所示。当在维多利亚蓝B操作液中加入Tris-HCl(pH9.27)溶液后，ＲLS信号显著增强，如曲线3所示。在曲线3溶液的基础上加入0.00～2.00mL的甜蜜素标准操作液，从曲线3～7可知，光谱曲线在369nm处有一最大特征散射峰，此峰与单独的维多利亚蓝B相比较，红移31nm。在体系溶液的特征峰处，一定浓度范围的甜蜜素的质量浓度(或物质的量浓度)与体系溶液的共振光散射增强强度ΔIＲLS呈线性关系。故选择369nm作为测定波长，用于甜蜜素的定量分析。

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