中药橘红抗氧化作用初步研究（一）

中药橘红为芸香科植物橘Citrus.reticulate.Blanco及其栽培变种的中药外层果皮，性温，橘红究味辛、抗氧苦，化作归肺、用初脾经。步研具有理气健脾、中药燥湿化痰的橘红究功效，用以治疗脾胃气滞引起的抗氧胸膈胀满、食积伤酒及痰湿壅肺的化作胸膈满闷、喘满痰多等症。用初文献关于橘红的步研化学成分报道较少，主要有挥发油和黄酮，中药具有多种药理作用，橘红究如橘红素具有抗肿瘤、抗氧抗炎、抗哮喘、神经保护等作用。

研究中药橘红的抗氧化活性，首先比较了十二个提取物样品在同浓度下清除2.2-二苯基-1-苦基肼自由基(DPPH)作用、金属离子螯合能力和对黄嘌呤氧化酶的抑制作用，以确定效果较好的样品和抗氧化模型；然后将活性较好的样品采用制备薄层层析法进一步分离，比较所得样品对较适宜抗氧化模型的作用；最后初步确定活性较好的样品结构类型。实验结果表明乙酸乙酯提取物所分的两个部分和无水乙醇提取物所分的两个部分对DPPH自由基清除作用相对较强；经制备薄层层析法进一步得到的二个黄酮类样品清除DPPH自由基作用与浓度呈较好的量效关系。

机体内的氧化损伤会导致许多疾病的产生，如心血管疾病、白内障、关节炎和癌症等，而抗氧化剂是一类能够延缓、阻止或消除氧化损伤的物质，按其来源可分为人工合成抗氧化剂和天然抗氧化剂。其中天然抗氧化剂因其安全高效性而受到人们的喜爱，是当前抗氧化剂研究中的热点领域。中草药是天然抗氧化剂的重要来源，学者认为某些中草药的疗效与其抗氧化作用密切相关，从中草药中开发高效抗氧化剂对食品工业、医药、营养学均有重要意义。抗氧化作用机理可以是直接作用在自由基或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应，包括鳌合金属离子、清除自由基、淬灭单线态氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。

为了研究橘红中的抗氧化作用成分，本实验首先将橘红干燥、粉碎后过100目筛，用石油醚Ⅱ、氯仿、乙酸乙酯、无水乙醇、甲醇和蒸馏水依次对其进行回流提取，每种提取物再根据是否溶于无水乙醇或其溶液分为二个部分，共得到十二个部分，研究它们在同浓度下对不同抗氧化模型的作用，包括清除2.2-二苯基-1-苦基肼自由基作用、金属离子螯合能力和对黄嘌呤氧化酶的抑制作用，以确定活性较好的部位和作用模型；然后将活性部位采用制备薄层层析法进一步分离，测定所得样品对较好作用模型的抗氧化活性，筛选出活性较好的样品并采用物化数据、颜色反应初步确定其结构类型，以期为其作为天然抗氧化剂提供理论参考。

1实验部分

1.1材料与仪器

DGG-9070AD电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司)；XL-30C超微粉碎机(广州市旭朗机械设备有限公司)；JA2603B电子天平(上海精制天美科学仪器有限公司)；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(郑州予华仪器制造有限公司)；N-1300旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)；SB-1300水浴锅(上海爱朗仪器有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)型循环水真空泵(上海邦西仪器科技有限公司)；TDL-40低速台式大容量离心机(上海安亭科学仪器厂)；ZF-1三用紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)；UV-3100PC紫外可见分光光度计(上海美普达仪器有限公司)。

橘红(购自浙江省金华市磐安药市)；2.2-二苯基-1-苦味酰基自由基(DPPH)、氯化亚铁、黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、菲啰嗪单钠盐(上海晶纯生化科技股份有限公司)；羧甲基纤维素钠(天津市科密欧化学试剂有限公司)；GF254薄层层析用硅胶(青岛海洋化工有限公司)；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、无水乙醇、乙二胺四乙酸、碳酸钠、氢氧化钠(分析纯，广州化学试剂厂)；二甲基亚砜(天津市广成化学试剂有限公司)。

1.2实验方法

1.2.1各提取物部分样品抗氧化活性测试

称取50.00g橘红粉末，用500mL石油醚回流提取1h，提取2次，合并提取液，减压蒸馏去除溶剂，得到石油醚提取物(1)，加入15mL无水乙醇摇匀，4000r/min离心10分钟，得到溶解部分(1a)和沉淀部分(1b)。同法，氯仿提取物分为醇溶解部分(2a)和沉淀部分(2b)；乙酸乙酯提取物分为醇溶解部分(3a)和沉淀部分(3b)；无水乙醇提取物分为醇溶解部分(4a)和沉淀部分(4b)；甲醇提取物分为甲醇/无水乙醇=1︰1溶解部分(5a)和沉淀部分(5b)；蒸馏水提取物分为无水乙醇/水=1︰1溶解部分(6a)和沉淀部分(6b)。观察各部分颜色外观，称重并计算得率。

将上述各部分样品分别用二甲亚砜配制为1.00mg/mL待测液。以抗坏血酸(Vc)为对照，参考文献方法清除DPPH自由基；参考范金波等的实验方法测定各样品溶液与金属离子(Fe²⁺)的螯合能力；参考郭少英等的实验方法，测定各样品溶液对黄嘌呤氧化酶(XOD)的抑制作用。

1.2.2各薄层层析制备样品抗氧化活性测试

将1.2.1实验结果较显著的提取物部分用甲醇溶解，采用制备薄层层析法(PTLC)分离，紫外反射仪上观察，将比较明显的斑点刮下溶解后过滤，滤液室温晾干后烘箱干燥，观察颜色外观、称重并计算得率。

各样品均用二甲亚砜配制成1.00mg/mL待测液，按照1.2.1实验部分测定它们对较好抗氧化实验模型的作用。将活性效果较好的样品配制成不同浓度，测试浓度与清除率的对应关系。

1.2.3活性样品结构类型初步鉴定

通过理化性质和显色反应初步确定活性较好的样品的化学结构类型。

1.2.4数据统计分析

活性实验重复3次，实验结果均表示为平均值。采用MicrosoftOfficeExcel2007软件进行数据处理。

2结果与分析

2.1各提取物部分样品抗氧化活性结果与分析

橘红粉末依次用石油醚Ⅱ、氯仿、乙酸乙酯、无水乙醇、甲醇和蒸馏水提取，所得各提取物再根据在无水乙醇或其50%乙醇溶液中的溶解性分为两个部分，共得到十二个样品，其理化性质见表1。从中可以看出得率大小为：4a>6b>5b>5a>4b>6a>3b>1b>1a>2b>3a>2a，其中6a和6b部分颜色较深，其它提取物部分颜色相对较浅。

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