酶底物法快速测定地表水中粪大肠菌群实验研究

粪大肠菌群是酶底总大肠菌群中的一部分。 主要来自粪便遥在 44.5益温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的物法大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的快速方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开， 使培养出来的测定肠菌菌主要为来自粪便中的大肠菌群， 从而更准确地反映出水质受粪便污染的地表情况 现阶段袁粪大肠菌群检测最常用的方法是多管发酵法和滤膜法。 但是水中这两种方法测定的时间都很长袁至少需要 48 h，步骤繁琐需要验证试验，群实同时无菌操作对实验室硬件设施的验研要求 非常高。 而固定底物酶底物法分析 1 个样品在实验室内操作的酶底时间仅需要 1 min培养时间也缩短为 24 h在普通实验室内就能进行， 酶底物法能抑 制 200 万个异样细菌精确检测到每 100 mL 样品中的物法 1 个粪大肠菌群。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

主要仪器与试剂详见表 1。快速

1.2 实验原理

在培养温度为 44.5依1益条件下袁粪大肠菌群细 菌 能 特 异 性 产 生 茁 一 半 乳 糖 苷 酶，测定肠菌该生物酶可以分解色原底物释放色 原体使培养液呈黄色袁 使培养液呈黄色变化的地表原 理来测定水中粪大肠菌群。

1.3 实验步骤

1 采用 100mL 无菌取样瓶取 100mL 混匀水 样 (如果水样粪大肠菌群数大于2005 个/L则酌情少 取并用新配置的水中超纯水稀释至 100mL 刻度线)。 

2 在装有水样的群实取样瓶中加入科立得 TM(Colilert余)试剂袁充分摇匀袁使试剂完全溶解。 

3 把溶解完全水样倒入无菌培养定量盘(97孔)。

4 采用带 97 孔定量盘橡胶托垫在封口机上 进行封装。

5 把封装好的 97 孔定量盘放人 44.5+1oC 恒 温培养箱中培养 24h。

6 培养 24h 后从培养箱中取出与 97 孔阳性标准比色盘进行比较黄色孔颜色比 97 孔阳性 标准比色盘深的表明为阳性反应根据 97 孔定量盘上的阳性孔数 对照 IDEXX 公司提供的 MPN表报出结果。

1.3 样品来源

水样来源于庆阳市蒲河地表水及巴家咀地表饮用水源水质袁 按照 叶地表水和污水监测技术规 HJ/T91-2002的规定采集并于 0耀4益低温避 光保存6h 内进行分析测试。

 2 结果与讨论

2.1 试验结果
本次实验各取庆阳市蒲河地表水和巴家咀饮 用水源水 30 份样品分别用酶底物法和多管发酵 法进行监测对比分析袁结果见表 2。

2.2 数据分析

运用软件 Excel2007, 对 2 种方法监测的粪大肠菌群结果进行配对 t 检验袁为了使 2 组数据呈正 态分布 现对数据进行对数处理后再进行 t 检验结果见表 3。

由表 3 可见泊松相关系数为 0.98尧0.994属 强相关渊系数越趋于 1袁相关性直越好袁说明两组 数据的相关性很好曰 P=0.426 和 0.725袁跃0.05袁说明 两组数据无统计学意义上的显著性差异可认为多管发酵法与酶底物法实验结果具有可比性与 相关文献相符具有较好的一致性。

2.3 讨论

1 酶底物法与多管发酵法分别测定以庆阳 市境内的蒲河为代表的水样中的粪大肠菌群两 者没有统计学意义上的差异遥 文中的分析结果与 相关参考文献的结论有较好的一致性 。

2 酶底物法测定地表水中的粪大肠菌群袁操 作简便监测的时效性优于传统的分析方法袁监测周期短前期准备工作少袁对实验条件和人员要求 低袁能够快速的监测水质微生物污染程序袁满足环境监测技术要求。

3 酶底物法在美国尧欧洲及部分亚洲国家被广泛应用于水中尧 粪大肠菌群及大肠埃希氏菌的检测并通过美国 EPA 认证遥 中国也列入了叶生活 饮 用 水 标 准 检 验 方 法 微 生 物 指 标 曳 (GB 辕 T 5750援12要2006)袁可以测定生活饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌 广东省质量技术监督局于 2013 年批准发布了地方标准叶水中菌落总数 复合 酶底物检测方法曳(DB44 辕 T 1163要2013)遥 酶底物法在国内正逐步开始推广 但是由于该方法的成本较高袁目前还没有被广泛使用 如果将来试剂尧耗 材价格能有所下降 水样的测定范围能进一步提 高一定会得到更好的推广。 

3 结论

固定底物酶底物法测定水样中的粪大肠菌群具有较高的精密度和准确性袁与多管发酵法进 行比较在统计学意义上无显著性差异 能满足环 境监测技术要求遥 该方法操作简便尧快捷袁工作效 率得到了明显提高袁适合批量分析水质类样品建 议国家有关部门出台水中粪大肠菌群酶底物分析方法。

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